Sel HMC3

Garis sel Human Microglial Clone 3 (HMC3) dikembangkan pada tahun 1995 oleh tim Profesor Tardieu melalui imortalisasi sel mikroglial yang bergantung pada SV40 dari sumsum tulang belakang manusia dan jaringan kortikal, yang diperoleh dari embrio yang berusia antara 8 hingga 12 minggu. Sel-sel primer ini, yang ditandai dengan pembelahan yang lambat dan morfologi yang kompleks, pada awalnya dikultur selama 10-15 hari sebelum diimortalisasi. Sel-sel HMC3 mempertahankan beberapa fitur utama mikroglia primer, seperti ekspresi beragam penanda mieloid seperti CD68, CD11b, dan CD14, meskipun tingkat ekspresinya sangat bervariasi dengan pilihan antibodi primer, terutama untuk CD68.

Setelah imortalisasi, sel HMC3 menunjukkan peningkatan tingkat proliferasi, dengan waktu penggandaan antara 24 dan 48 jam, sambil mempertahankan banyak karakteristik fenotipik dan morfologi dari rekan-rekan utama mereka. Secara khusus, terdapat proporsi yang lebih tinggi dari sel CD68 EBM/11-positif dan penurunan aktivitas fagositosis dibandingkan dengan sel primer. Stabilitas dalam ekspresi antigenik dikonfirmasi di seluruh 35 bagian, dengan sel-sel tetap positif untuk NSE, CD68, dan CD11b, tetapi negatif untuk CD14, MHCII, dan CD4 dalam kondisi awal. Namun, paparan interferon-γ (IFNγ) meningkatkan ekspresi MHCII, menyelaraskan lebih dekat dengan respons kultur primer terhadap perlakuan yang sama.

Secara fungsional, garis HMC3 membedakan dirinya dengan memproduksi tingkat interleukin-6 (IL-6) yang lebih tinggi dalam kondisi basal dibandingkan dengan klon lain. Meskipun demikian, perbandingan langsung dengan produksi sitokin sel mikroglial primer tetap menantang karena perbedaan metodologis. Respons terhadap stimulasi lipopolisakarida (LPS) pada garis-garis yang diabadikan ini tampak berkurang dibandingkan dengan kultur primer. Konsisten dengan karakteristik mikroglia primer, HMC3 dan garis kloning lainnya tidak menghasilkan tumor necrosis factor-alpha (TNFα), baik secara spontan maupun setelah stimulasi proinflamasi, yang menyoroti sifat spesifik mikroglia embrionik manusia.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami