HMC3 šūnas

Cilvēka mikrogliju klona 3 (HMC3) šūnu līniju 1995. gadā izstrādāja profesora Tardjē komanda, izmantojot SV40 atkarīgu mikrogliju šūnu imortalizāciju no cilvēka muguras smadzeņu un galvas smadzeņu garozas audiem, kas iegūti no 8 līdz 12 nedēļu veciem embrijiem. Šīs primārās šūnas, kurām raksturīga lēna dalīšanās un sarežģīta morfoloģija, pirms imortalizācijas sākotnēji tika kultivētas 10-15 dienas. HMC3 šūnas saglabāja vairākas primārās mikroglijas galvenās pazīmes, piemēram, tādu mieloīdu marķieru kā CD68, CD11b un CD14 daudzveidīgu ekspresiju, lai gan ekspresijas līmeņi ievērojami atšķīrās atkarībā no primārās antivielas izvēles, jo īpaši CD68 gadījumā.

Pēc imortalizācijas HMC3 šūnas uzrādīja paaugstinātu proliferācijas ātrumu ar dubultošanās laiku no 24 līdz 48 stundām, vienlaikus saglabājot daudzas fenotipiskās un morfoloģiskās īpašības, kas raksturīgas to primārajām šūnām. Īpaši jāatzīmē lielāks CD68 EBM/11 pozitīvo šūnu īpatsvars un fagocītiskās aktivitātes samazināšanās salīdzinājumā ar primārajām šūnām. Antigēnu ekspresijas stabilitāte tika apstiprināta 35 pasāžu laikā, šūnām saglabājoties pozitīvām attiecībā uz NSE, CD68 un CD11b, bet negatīvām attiecībā uz CD14, MHCII un CD4 bāzes apstākļos. Tomēr interferona-γ (IFNγ) iedarbība palielināja MHCII ekspresiju, kas vairāk atbilda primāro kultūru reakcijām uz to pašu apstrādi.

Funkcionāli HMC3 līnija izcēlās ar augstāku interleikīna-6 (IL-6) līmeni bāzes apstākļos salīdzinājumā ar citiem kloniem. Neraugoties uz to, tiešais salīdzinājums ar primāro mikrogliālo šūnu citokīnu produkciju joprojām ir sarežģīts metodoloģisko atšķirību dēļ. Šo imortalizēto līniju reakcija uz lipopolisaharīda (LPS) stimulāciju izrādījās mazāka salīdzinājumā ar primārajām kultūrām. Atbilstoši primāro mikrogliju īpašībām HMC3 un citas klonētās līnijas nedeva audzēja nekrozes faktoru alfa (TNFα) ne spontāni, ne pēc proiekaisuma stimulācijas, uzsverot cilvēka embrionālo mikrogliju specifisku iezīmi.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu