Células HMC3

A linha celular Human Microglial Clone 3 (HMC3) foi desenvolvida em 1995 pela equipa do Professor Tardieu através da imortalização dependente de SV40 de células microgliais de tecidos da medula espinal e corticais humanos, obtidos de embriões com idades compreendidas entre as 8 e as 12 semanas. Estas células primárias, caracterizadas por uma divisão lenta e morfologias complexas, foram inicialmente cultivadas durante 10-15 dias antes da imortalização. As células HMC3 mantiveram várias caraterísticas-chave da microglia primária, tais como uma expressão diversificada de marcadores mielóides como CD68, CD11b e CD14, embora os níveis de expressão variassem notavelmente com a escolha do anticorpo primário, particularmente para CD68.

Após a imortalização, as células HMC3 exibiram taxas de proliferação melhoradas, com tempos de duplicação entre 24 e 48 horas, preservando ao mesmo tempo muitas caraterísticas fenotípicas e morfológicas das suas contrapartes primárias. Em particular, verificou-se uma maior proporção de células positivas para CD68 EBM/11 e uma redução da atividade fagocítica em comparação com as células primárias. A estabilidade na expressão antigénica foi confirmada ao longo de 35 passagens, com as células a permanecerem positivas para NSE, CD68 e CD11b, mas negativas para CD14, MHCII e CD4 em condições de base. No entanto, a exposição ao interferão-γ (IFNγ) elevou a expressão de MHCII, alinhando-se mais estreitamente com as respostas da cultura primária ao mesmo tratamento.

Funcionalmente, a linha HMC3 distinguiu-se pela produção de níveis mais elevados de interleucina-6 (IL-6) em condições basais, em comparação com outros clones. Apesar disso, uma comparação direta com a produção de citocinas das células microgliais primárias continua a ser um desafio devido a diferenças metodológicas. A resposta à estimulação com lipopolissacárido (LPS) nestas linhas imortalizadas pareceu diminuída em relação às culturas primárias. Em consonância com as caraterísticas microgliais primárias, a HMC3 e outras linhas clonadas não produziram fator de necrose tumoral alfa (TNFα), quer espontaneamente quer após estimulação pró-inflamatória, salientando uma caraterística específica da microglia embrionária humana.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia