Cellule HMC3

La linea cellulare Human Microglial Clone 3 (HMC3) è stata sviluppata nel 1995 dall'équipe del professor Tardieu attraverso l'immortalizzazione SV40-dipendente di cellule microgliali provenienti da tessuti spinali e corticali umani, ottenuti da embrioni di età compresa tra 8 e 12 settimane. Queste cellule primarie, caratterizzate da una divisione lenta e da una morfologia complessa, sono state inizialmente coltivate per 10-15 giorni prima dell'immortalizzazione. Le cellule HMC3 hanno mantenuto diverse caratteristiche chiave delle microglia primarie, come la diversa espressione di marcatori mieloidi come CD68, CD11b e CD14, anche se i livelli di espressione variavano notevolmente con la scelta dell'anticorpo primario, in particolare per il CD68.

Dopo l'immortalizzazione, le cellule HMC3 hanno mostrato tassi di proliferazione più elevati, con tempi di raddoppio compresi tra 24 e 48 ore, pur conservando molte caratteristiche fenotipiche e morfologiche delle loro controparti primarie. In particolare, è stata riscontrata una maggiore proporzione di cellule CD68 EBM/11-positive e una riduzione dell'attività fagocitaria rispetto alle cellule primarie. La stabilità dell'espressione antigenica è stata confermata attraverso 35 passaggi: le cellule sono rimaste positive per NSE, CD68 e CD11b, ma negative per CD14, MHCII e CD4 in condizioni di base. Tuttavia, l'esposizione all'interferone-γ (IFNγ) ha aumentato l'espressione di MHCII, allineandosi maggiormente alle risposte delle colture primarie allo stesso trattamento.

Dal punto di vista funzionale, la linea HMC3 si è distinta per la produzione di livelli più elevati di interleuchina-6 (IL-6) in condizioni basali rispetto agli altri cloni. Nonostante ciò, un confronto diretto con la produzione di citochine delle cellule microgliali primarie rimane difficile a causa delle differenze metodologiche. La risposta alla stimolazione con lipopolisaccaridi (LPS) in queste linee immortalizzate è apparsa ridotta rispetto alle colture primarie. Coerentemente con le caratteristiche delle microglia primarie, le linee HMC3 e le altre linee clonate non hanno prodotto il fattore di necrosi tumorale alfa (TNFα), né spontaneamente né in seguito a stimolazione pro-infiammatoria, evidenziando una caratteristica specifica delle microglia embrionali umane.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia