HMC3-solut

Professori Tardieun työryhmä kehitti vuonna 1995 Human Microglial Clone 3 (HMC3) -solulinjan SV40-riippuvaisesti kuolemattomaksi tekemällä mikrogliasoluja ihmisen selkäydin- ja aivokuoren kudoksista, jotka oli saatu 8-12 viikon ikäisistä alkioista. Näitä primaarisoluja, joille on ominaista hidas jakautuminen ja monimutkainen morfologia, viljeltiin aluksi 10-15 päivää ennen kuolemattomaksi tekemistä. HMC3-solut säilyttivät useita primaaristen mikrogliasolujen keskeisiä piirteitä, kuten myeloidisten merkkiaineiden, kuten CD68, CD11b ja CD14, monipuolisen ilmentymisen, vaikka ilmentymistasot vaihtelivat huomattavasti primaarisen vasta-aineen valinnasta riippuen, erityisesti CD68:n osalta.

Immortalisoinnin jälkeen HMC3-soluilla oli lisääntynyt proliferaatiovauhti, ja niiden kaksinkertaistumisajat olivat 24-48 tuntia, mutta ne säilyttivät monia primaaristen solujensa fenotyyppisiä ja morfologisia ominaisuuksia. Erityisesti CD68 EBM/11 -positiivisten solujen osuus oli suurempi ja fagosyyttinen aktiivisuus väheni primaarisoluihin verrattuna. Antigeeniekspression vakaus vahvistettiin 35 passagea myöten, ja solut pysyivät positiivisina NSE:n, CD68:n ja CD11b:n suhteen, mutta negatiivisina CD14:n, MHCII:n ja CD4:n suhteen perusolosuhteissa. Interferoni-γ:lle (IFNγ) altistuminen lisäsi kuitenkin MHCII:n ilmentymistä, mikä vastasi paremmin primaariviljelmien vasteita samalle hoidolle.

Toiminnallisesti HMC3-linja erottautui muista klooneista tuottamalla enemmän interleukiini-6:ta (IL-6) perusolosuhteissa. Tästä huolimatta suora vertailu primaaristen mikrogliasolujen sytokiinituotantoon on edelleen haastavaa menetelmien erojen vuoksi. Vaste lipopolysakkaridistimulaatioon (LPS) näissä kuolemattomiksi muuttuneissa linjoissa näytti olevan heikompi kuin primaariviljelmissä. Ensisijaisten mikroglialien ominaisuuksien mukaisesti HMC3- ja muut kloonatut linjat eivät tuottaneet tuumorinekroositekijä-alfaa (TNFα) spontaanisti tai pro-inflammatorisen stimulaation jälkeen, mikä korostaa ihmisen alkion mikroglioiden erityispiirrettä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa