HMC3-celler

Cellelinjen Human Microglial Clone 3 (HMC3) blev udviklet i 1995 af professor Tardieus team gennem SV40-afhængig udødeliggørelse af mikrogliaceller fra human rygmarv og kortikalt væv fra embryoner i alderen 8 til 12 uger. Disse primære celler, der er kendetegnet ved langsom deling og komplekse morfologier, blev oprindeligt dyrket i 10-15 dage før udødeligheden. HMC3-cellerne bevarede flere af de vigtigste træk ved primære mikroglia, såsom et varieret udtryk for myeloide markører som CD68, CD11b og CD14, selv om udtryksniveauerne varierede betydeligt med valget af primært antistof, især for CD68.

Efter udødeliggørelse udviste HMC3-cellerne øget spredning med fordoblingstider på mellem 24 og 48 timer, samtidig med at de bevarede mange fænotypiske og morfologiske egenskaber fra deres primære modstykker. Især var der en højere andel af CD68 EBM/11-positive celler og en reduktion i fagocytisk aktivitet sammenlignet med de primære celler. Stabiliteten i det antigene udtryk blev bekræftet på tværs af 35 passager, hvor cellerne forblev positive for NSE, CD68 og CD11b, men negative for CD14, MHCII og CD4 under baseline-betingelser. Eksponering for interferon-γ (IFNγ) øgede imidlertid MHCII-ekspressionen, hvilket stemmer bedre overens med primærkulturens reaktion på den samme behandling.

Funktionelt skilte HMC3-linjen sig ud ved at producere højere niveauer af interleukin-6 (IL-6) under basale forhold sammenlignet med andre kloner. På trods af dette er en direkte sammenligning med primære mikrogliacellers cytokinproduktion stadig en udfordring på grund af metodologiske forskelle. Responsen på lipopolysaccharid (LPS)-stimulering i disse udødeliggjorte linjer så ud til at være reduceret i forhold til primære kulturer. I overensstemmelse med primære mikroglia-egenskaber producerede HMC3 og andre klonede linjer ikke tumornekrosefaktor-alfa (TNFα), hverken spontant eller efter pro-inflammatorisk stimulering, hvilket fremhæver et specifikt træk ved humane embryonale mikroglia.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring