Komórki HMC3

Linia komórkowa Human Microglial Clone 3 (HMC3) została opracowana w 1995 roku przez zespół profesora Tardieu poprzez zależną od SV40 immortalizację komórek mikrogleju z ludzkiego rdzenia kręgowego i tkanek korowych, uzyskanych z zarodków w wieku od 8 do 12 tygodni. Te pierwotne komórki, charakteryzujące się powolnym podziałem i złożoną morfologią, były początkowo hodowane przez 10-15 dni przed immortalizacją. Komórki HMC3 zachowały kilka kluczowych cech pierwotnych mikrogleju, takich jak zróżnicowana ekspresja markerów szpikowych, takich jak CD68, CD11b i CD14, chociaż poziomy ekspresji różniły się znacznie w zależności od wyboru pierwotnego przeciwciała, szczególnie dla CD68.

Po immortalizacji komórki HMC3 wykazywały zwiększone tempo proliferacji, z czasem podwojenia między 24 a 48 godzin, zachowując jednocześnie wiele cech fenotypowych i morfologicznych swoich pierwotnych odpowiedników. W szczególności, stwierdzono wyższy odsetek komórek CD68 EBM/11-dodatnich i zmniejszenie aktywności fagocytarnej w porównaniu do komórek pierwotnych. Stabilność ekspresji antygenowej została potwierdzona w 35 pasażach, przy czym komórki pozostały dodatnie dla NSE, CD68 i CD11b, ale ujemne dla CD14, MHCII i CD4 w warunkach wyjściowych. Jednak ekspozycja na interferon-γ (IFNγ) zwiększyła ekspresję MHCII, co jest bardziej zbliżone do odpowiedzi hodowli pierwotnej na to samo leczenie.

Funkcjonalnie, linia HMC3 wyróżniała się wytwarzaniem wyższych poziomów interleukiny-6 (IL-6) w warunkach podstawowych w porównaniu do innych klonów. Pomimo tego, bezpośrednie porównanie z produkcją cytokin przez pierwotne komórki mikrogleju pozostaje trudne ze względu na różnice metodologiczne. Odpowiedź na stymulację lipopolisacharydem (LPS) w tych unieśmiertelnionych liniach wydawała się zmniejszona w porównaniu z kulturami pierwotnymi. Zgodnie z pierwotnymi cechami mikrogleju, HMC3 i inne sklonowane linie nie wytwarzały czynnika martwicy nowotworów alfa (TNFα), ani spontanicznie, ani po stymulacji prozapalnej, podkreślając specyficzną cechę ludzkich mikrogleju embrionalnego.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym