Bunky HMC3

Bunková línia Human Microglial Clone 3 (HMC3) bola vyvinutá v roku 1995 tímom profesora Tardieua prostredníctvom imortalizácie mikrogliových buniek z ľudských miechových a kortikálnych tkanív, získaných z embryí vo veku 8 až 12 týždňov, v závislosti od SV40. Tieto primárne bunky, ktoré sa vyznačujú pomalým delením a komplexnou morfológiou, boli pred imortalizáciou spočiatku kultivované 10 - 15 dní. Bunky HMC3 si zachovali niekoľko kľúčových znakov primárnej mikroglie, ako napríklad rôznorodú expresiu myeloidných markerov, napríklad CD68, CD11b a CD14, hoci úrovne expresie sa výrazne líšili v závislosti od výberu primárnej protilátky, najmä v prípade CD68.

Po imortalizácii bunky HMC3 vykazovali zvýšenú mieru proliferácie s časom zdvojnásobenia medzi 24 a 48 hodinami, pričom si zachovali mnohé fenotypové a morfologické charakteristiky svojich primárnych náprotivkov. V porovnaní s primárnymi bunkami bol zaznamenaný vyšší podiel CD68 EBM/11 pozitívnych buniek a zníženie fagocytárnej aktivity. Stabilita antigénnej expresie sa potvrdila počas 35 pasáží, pričom bunky zostali pozitívne pre NSE, CD68 a CD11b, ale negatívne pre CD14, MHCII a CD4 za základných podmienok. Vystavenie interferónu-γ (IFNγ) však zvýšilo expresiu MHCII, čo sa viac zhoduje s odpoveďami primárnej kultúry na rovnakú liečbu.

Z funkčného hľadiska sa línia HMC3 vyznačovala vyššou produkciou interleukínu-6 (IL-6) za základných podmienok v porovnaní s ostatnými klonmi. Napriek tomu je priame porovnanie s produkciou cytokínov primárnymi mikrogliovými bunkami naďalej náročné vzhľadom na metodologické rozdiely. Odpoveď na stimuláciu lipopolysacharidom (LPS) v týchto imortalizovaných líniách sa ukázala ako znížená v porovnaní s primárnymi kultúrami. V súlade s charakteristikami primárnych mikroglií HMC3 a ďalšie klonované línie neprodukovali tumor nekrotizujúci faktor alfa (TNFα), a to ani spontánne, ani po prozápalovej stimulácii, čo poukazuje na špecifickú vlastnosť ľudských embryonálnych mikroglií.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke