เซลล์ HMC3

เซลล์ไลน์ไมโครเกลียคลอน 3 ของมนุษย์ (HMC3) ถูกพัฒนาขึ้นในปี 1995 โดยทีมของศาสตราจารย์ Tardieu ผ่านกระบวนการทำให้เซลล์ไมโครเกลียจากไขสันหลังและเนื้อเยื่อคอร์เท็กซ์ของมนุษย์เป็นอมตะโดยอาศัย SV40 ซึ่งได้มาจากตัวอ่อนอายุระหว่าง 8 ถึง 12 สัปดาห์ เซลล์ปฐมภูมิเหล่านี้มีลักษณะเด่นคือมีการแบ่งตัวช้าและมีรูปร่างซับซ้อน โดยถูกเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 10-15 วันก่อนกระบวนการทำให้เป็นอมตะเซลล์ HMC3 ยังคงรักษาลักษณะสำคัญหลายประการของไมโครเกลียชนิดปฐมภูมิ เช่น การแสดงออกที่หลากหลายของตัวบ่งชี้ไมอีลอยด์ เช่น CD68, CD11b และ CD14 แม้ว่าระดับการแสดงออกจะแตกต่างกันอย่างเห็นได้ชัดตามการเลือกแอนติบอดีปฐมภูมิ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ CD68

หลังจากการทำให้เป็นอมตะ เซลล์ HMC3 แสดงอัตราการเพิ่มจำนวนที่มากขึ้น โดยมีเวลาในการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าอยู่ระหว่าง 24 ถึง 48 ชั่วโมง ในขณะที่ยังคงลักษณะทางฟีโนไทป์และสัณฐานวิทยาหลายประการของเซลล์ต้นกำเนิดไว้ได้อย่างสมบูรณ์ ที่น่าสังเกตคือ มีสัดส่วนของเซลล์ที่ให้ผลบวกกับ CD68 EBM/11 สูงกว่า และกิจกรรมการกินเซลล์ลดลงเมื่อเทียบกับเซลล์ต้นกำเนิดความเสถียรในการแสดงออกของแอนติเจนได้รับการยืนยันตลอด 35 ครั้งของการผ่านเซลล์ โดยเซลล์ยังคงแสดงผลบวกต่อ NSE, CD68 และ CD11b แต่แสดงผลลบต่อ CD14, MHCII และ CD4 ภายใต้สภาวะพื้นฐาน อย่างไรก็ตาม การสัมผัสกับอินเตอร์เฟอรอน-&แกมมา; (IFNγ) ส่งผลให้การแสดงออกของ MHCII เพิ่มขึ้น ซึ่งสอดคล้องกับการตอบสนองของการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิต่อการรักษาเดียวกันมากขึ้น

ในเชิงหน้าที่ สายพันธุ์ HMC3 โดดเด่นด้วยการผลิตอินเตอร์ลิวคิน-6 (IL-6) ในระดับที่สูงกว่าภายใต้สภาวะพื้นฐานเมื่อเทียบกับโคลนอื่นๆ อย่างไรก็ตาม การเปรียบเทียบโดยตรงกับการผลิตไซโตไคน์ของเซลล์ไมโครเกลียลปฐมภูมิยังคงเป็นเรื่องท้าทายเนื่องจากความแตกต่างในวิธีการศึกษา การตอบสนองต่อการกระตุ้นด้วยลิโพโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS) ในสายพันธุ์อมตะเหล่านี้ดูเหมือนจะลดลงเมื่อเทียบกับการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิสอดคล้องกับลักษณะเฉพาะของไมโครเกลียชนิดปฐมภูมิ HMC3 และสายพันธุ์โคลนอื่นๆ ไม่ได้ผลิตปัจจัยเนื้องอกเนโครซิส-อัลฟา (TNFα) ทั้งโดยธรรมชาติหรือหลังจากการกระตุ้นให้เกิดการอักเสบ ซึ่งเน้นย้ำถึงลักษณะเฉพาะของไมโครเกลียจากตัวอ่อนมนุษย์

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.