HMC3-celler

Cellinjen Human Microglial Clone 3 (HMC3) utvecklades 1995 av professor Tardieus team genom SV40-beroende immortalisering av mikrogliaceller från mänsklig ryggmärg och kortikala vävnader, erhållna från embryon som var mellan 8 och 12 veckor gamla. Dessa primära celler, som kännetecknas av långsam delning och komplexa morfologier, odlades inledningsvis i 10-15 dagar innan de odödliggjordes. HMC3-cellerna behöll flera viktiga egenskaper hos primära mikroglia, såsom ett varierat uttryck av myeloida markörer som CD68, CD11b och CD14, även om uttrycksnivåerna varierade avsevärt med valet av primär antikropp, särskilt för CD68.

Efter odödliggörandet uppvisade HMC3-cellerna en ökad proliferationshastighet, med fördubblingstider på mellan 24 och 48 timmar, samtidigt som de bevarade många fenotypiska och morfologiska egenskaper hos sina primära motsvarigheter. Framför allt fanns det en högre andel CD68 EBM/11-positiva celler och en minskning av den fagocyterande aktiviteten jämfört med de primära cellerna. Stabiliteten i det antigena uttrycket bekräftades efter 35 passager, där cellerna förblev positiva för NSE, CD68 och CD11b, men negativa för CD14, MHCII och CD4 under baslinjeförhållanden. Exponering för interferon-γ (IFNγ) ökade dock MHCII-uttrycket, vilket stämmer bättre överens med primärkulturens svar på samma behandling.

Funktionellt utmärkte sig HMC3-linjen genom att producera högre nivåer av interleukin-6 (IL-6) under basala förhållanden jämfört med andra kloner. Trots detta är en direkt jämförelse med primära mikrogliacellers cytokinproduktion fortfarande en utmaning på grund av metodologiska skillnader. Svaret på lipopolysackarid (LPS)-stimulering i dessa odödliga linjer verkade vara mindre än i primära kulturer. I överensstämmelse med primära mikrogliala egenskaper producerade HMC3 och andra klonade linjer inte tumörnekrosfaktor-alfa (TNFα), varken spontant eller efter proinflammatorisk stimulering, vilket belyser ett specifikt drag hos humana embryonala mikroglia.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring