Tế bào HMC3

Dòng tế bào Human Microglial Clone 3 (HMC3) được phát triển vào năm 1995 bởi nhóm nghiên cứu của Giáo sư Tardieu thông qua quá trình bất tử hóa phụ thuộc vào SV40 của các tế bào microglia từ mô tủy sống và vỏ não của người, được thu thập từ phôi thai có tuổi từ 8 đến 12 tuần. Các tế bào nguyên phát này, có đặc điểm là phân chia chậm và hình thái phức tạp, ban đầu được nuôi cấy trong 10-15 ngày trước khi tiến hành bất tử hóa. Các tế bào HMC3 duy trì nhiều đặc điểm quan trọng của tế bào microglia nguyên thủy, chẳng hạn như biểu hiện đa dạng của các dấu hiệu miễn dịch như CD68, CD11b và CD14, mặc dù mức độ biểu hiện thay đổi đáng kể tùy thuộc vào loại kháng thể nguyên thủy được sử dụng, đặc biệt là đối với CD68.

Sau khi bất tử hóa, các tế bào HMC3 thể hiện tốc độ phân chia tăng cao, với thời gian nhân đôi từ 24 đến 48 giờ, đồng thời duy trì nhiều đặc điểm hình thái và biểu hiện kiểu hình của các tế bào nguyên phát. Đáng chú ý, tỷ lệ tế bào dương tính với CD68 EBM/11 cao hơn và hoạt động thực bào giảm so với các tế bào nguyên phát. Sự ổn định trong biểu hiện kháng nguyên được xác nhận qua 35 lần truyền, với các tế bào vẫn dương tính với NSE, CD68 và CD11b, nhưng âm tính với CD14, MHCII và CD4 trong điều kiện cơ bản. Tuy nhiên, tiếp xúc với interferon-γ (IFNγ) làm tăng biểu hiện MHCII, tương đồng hơn với phản ứng của văn hóa nguyên phát đối với cùng liệu pháp.

Về mặt chức năng, dòng HMC3 nổi bật với việc sản xuất mức độ cao hơn của interleukin-6 (IL-6) dưới điều kiện cơ bản so với các dòng khác. Tuy nhiên, so sánh trực tiếp với sản xuất cytokine của tế bào microglia nguyên phát vẫn gặp khó khăn do sự khác biệt về phương pháp. Phản ứng với kích thích lipopolysaccharide (LPS) trong các dòng bất tử này dường như giảm so với nuôi cấy nguyên phát. Tương tự như đặc điểm của tế bào microglia nguyên phát, dòng HMC3 và các dòng được nhân bản khác không sản xuất yếu tố hoại tử khối u alpha (TNFα), dù là tự nhiên hay sau khi kích thích viêm, nhấn mạnh một đặc điểm cụ thể của tế bào microglia phôi người.

37°C, 5%_CO₂, môi trường ẩm.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

Tại Cytion, chúng tôi cam kết về chất lượng và khả năng sống của các sản phẩm của mình. Chúng tôi đảm bảo rằng các tế bào của chúng tôi sẽ có khả năng sống tại thời điểm bắt đầu nuôi cấy trong 60 ngày kể từ khi vận chuyển từ cơ sở của chúng tôi. Chúng tôi cam kết rằng tất cả các vật liệu tuân thủ các thông số kỹ thuật được mô tả trong Giấy chứng nhận phân tích và/hoặc Tài liệu sản phẩm.

Để biết chi tiết đầy đủ, vui lòng tham khảo <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Tuyên bố Bảo hành.