HMC3細胞

ヒトミクログリアクローン3（HMC3）細胞株は、1995年にTardieu教授のチームによって、8〜12週齢の胚から得られたヒト脊髄および皮質組織のミクログリア細胞をSV40依存的に不死化することによって開発された。ゆっくりとした分裂と複雑な形態を特徴とするこれらの初代細胞は、不死化する前にまず10-15日間培養された。HMC3細胞は、CD68、CD11b、CD14のような骨髄系マーカーの多様な発現など、初代ミクログリアのいくつかの重要な特徴を維持していたが、発現レベルは一次抗体の選択、特にCD68の選択によって著しく変化した。

不死化後、HMC3細胞は24時間から48時間の間に倍加し、増殖率が向上した。特に、CD68 EBM/11陽性細胞の割合が高く、貪食活性が初代細胞に比べて低下していた。抗原発現の安定性は35継代にわたって確認され、ベースライン条件下ではNSE、CD68、CD11bは陽性であったが、CD14、MHCII、CD4は陰性であった。しかし、インターフェロン-γ（IFNγ）に暴露されると、MHCIIの発現が上昇し、同じ治療に対する初代培養細胞の反応に近づいた。

機能的には、HMC3株は他のクローンと比較して、基底条件下でより高レベルのインターロイキン-6（IL-6）を産生することで区別された。にもかかわらず、初代ミクログリア細胞のサイトカイン産生と直接比較することは、方法論の違いから依然として困難である。これらの不死化株におけるリポ多糖（LPS）刺激に対する反応は、初代培養株と比較して低下しているように見えた。初代ミクログリアの特徴と一致して、HMC3株や他のクローン株は、自発的にも炎症性刺激後にも腫瘍壊死因子α（TNFα）を産生せず、ヒト胚ミクログリア特有の特徴を浮き彫りにした。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。