HMC3 rakud

Professor Tardieu töörühm töötas 1995. aastal välja inimese mikrogliarakkude klooni 3 (HMC3) rakuliini, milleks kasutas SV40-lt sõltuvat mikrogliarakkude immortaliseerimist inimese seljaaju ja kortikaalkudedest, mis saadi 8-12 nädala vanustest embrüotest. Neid esmaseid rakke, mida iseloomustab aeglane jagunemine ja keeruline morfoloogia, kasvatati esialgu 10-15 päeva enne immortaliseerimist. HMC3 rakud säilitasid mitmeid primaarse mikroglia põhijooni, nagu müeloidsete markerite nagu CD68, CD11b ja CD14 mitmekesine ekspressioon, kuigi ekspressiooni tase varieerus märkimisväärselt sõltuvalt primaarse antikeha valikust, eriti CD68 puhul.

Pärast immortaliseerimist näitasid HMC3 rakud suurenenud proliferatsioonikiirust, mille kahekordistumisaeg jäi vahemikku 24-48 tundi, säilitades samal ajal paljud nende primaarsete vastavate rakkude fenotüübi ja morfoloogilised omadused. Võrreldes primaarsete rakkudega oli suurem CD68 EBM/11-positiivsete rakkude osakaal ja vähenenud fagotsüütiline aktiivsus. Antigeeni ekspressiooni stabiilsus kinnitati 35 läbimise jooksul, kusjuures rakud jäid positiivseks NSE, CD68 ja CD11b suhtes, kuid negatiivseks CD14, MHCII ja CD4 suhtes algtingimustes. Interferoon-γ-ga (IFNγ) kokkupuude tõstis siiski MHCII ekspressiooni, mis vastas rohkem primaarkultuuri reaktsioonidele samale ravile.

Funktsionaalselt erines HMC3 liin teiste kloonidega võrreldes suurema interleukiin-6 (IL-6) produktsiooni poolest baastingimustes. Sellest hoolimata on otsene võrdlus primaarsete mikrogliarakkude tsütokiinide tootmisega metoodiliste erinevuste tõttu keeruline. Vastus lipopolüsahhariidi (LPS) stimulatsioonile tundus neil immortaliseeritud liinidel võrreldes primaarkultuuridega vähenenud. Kooskõlas primaarsete mikrogliade omadustega ei tootnud HMC3 ja teised kloonitud liinid kasvaja nekroosifaktor-alfa (TNFα) ei spontaanselt ega pärast põletikuvastast stimulatsiooni, mis tõstab esile inimese embrüonaalse mikroglia spetsiifilist omadust.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest