Buňky HMC3

Buněčná linie Human Microglial Clone 3 (HMC3) byla vyvinuta v roce 1995 týmem profesora Tardieuho prostřednictvím imortalizace mikrogliových buněk z lidské míchy a korové tkáně, získaných z embryí ve věku 8 až 12 týdnů, v závislosti na SV40. Tyto primární buňky, které se vyznačují pomalým dělením a složitou morfologií, byly před imortalizací zpočátku kultivovány po dobu 10 až 15 dnů. Buňky HMC3 si zachovaly několik klíčových znaků primárních mikroglie, jako je různorodá exprese myeloidních markerů, jako jsou CD68, CD11b a CD14, ačkoli úrovně exprese se výrazně lišily podle výběru primární protilátky, zejména pro CD68.

Po imortalizaci vykazovaly buňky HMC3 zvýšenou míru proliferace s dobou zdvojení mezi 24 a 48 hodinami, přičemž si zachovaly mnoho fenotypových a morfologických charakteristik svých primárních protějšků. Pozoruhodný byl vyšší podíl CD68 EBM/11 pozitivních buněk a snížení fagocytární aktivity ve srovnání s primárními buňkami. Stabilita antigenní exprese byla potvrzena napříč 35 pasážemi, přičemž buňky zůstaly pozitivní pro NSE, CD68 a CD11b, ale negativní pro CD14, MHCII a CD4 za základních podmínek. Vystavení interferonu-γ (IFNγ) však zvýšilo expresi MHCII, což se více shodovalo s reakcí primární kultury na stejnou léčbu.

Z funkčního hlediska se linie HMC3 vyznačovala vyšší produkcí interleukinu-6 (IL-6) za základních podmínek ve srovnání s ostatními klony. Přesto zůstává přímé srovnání s produkcí cytokinů primárními mikrogliovými buňkami kvůli metodickým rozdílům obtížné. Odpověď na stimulaci lipopolysacharidem (LPS) se u těchto imortalizovaných linií jevila jako snížená ve srovnání s primárními kulturami. V souladu s charakteristikami primárních mikroglií HMC3 a další klonované linie neprodukovaly tumor nekrotizující faktor alfa (TNFα), a to ani spontánně, ani po prozánětlivé stimulaci, což zdůrazňuje specifickou vlastnost lidských embryonálních mikroglií.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení