Celice HMC3

Celično linijo Human Microglial Clone 3 (HMC3) je leta 1995 razvila ekipa profesorja Tardieuja z imortalizacijo mikroglijskih celic iz človeških tkiv hrbtenjače in skorje, pridobljenih iz zarodkov, starih od 8 do 12 tednov, v odvisnosti od SV40. Te primarne celice, za katere je značilna počasna delitev in kompleksna morfologija, so bile pred imortalizacijo najprej gojene 10-15 dni. Celice HMC3 so ohranile več ključnih značilnosti primarnih mikroglijev, kot je raznoliko izražanje mieloidnih označevalcev, kot so CD68, CD11b in CD14, čeprav so se ravni izražanja zelo razlikovale glede na izbiro primarnega protitelesa, zlasti za CD68.

Po imortalizaciji so celice HMC3 pokazale večjo stopnjo proliferacije, pri čemer se je čas podvojitve gibal med 24 in 48 urami, hkrati pa so ohranile številne fenotipske in morfološke značilnosti svojih primarnih kolegov. V primerjavi s primarnimi celicami je bil delež celic, pozitivnih na CD68 EBM/11, večji, fagocitna aktivnost pa manjša. Stabilnost antigenskega izražanja je bila potrjena v 35 prehodih, pri čemer so celice ostale pozitivne za NSE, CD68 in CD11b, vendar negativne za CD14, MHCII in CD4 v osnovnih pogojih. Vendar je izpostavljenost interferonu-γ (IFNγ) povečala izražanje MHCII, kar se bolj ujema z odzivi primarnih kultur na isto zdravljenje.

Funkcionalno se je linija HMC3 razlikovala po tem, da je v primerjavi z drugimi kloni v osnovnih pogojih proizvajala višje ravni interlevkina-6 (IL-6). Kljub temu je neposredna primerjava s proizvodnjo citokinov v primarnih mikroglijskih celicah zaradi metodoloških razlik še vedno težavna. Odziv na stimulacijo z lipopolisaharidom (LPS) v teh imortaliziranih linijah je bil v primerjavi s primarnimi kulturami manjši. V skladu z značilnostmi primarnih mikroglij HMC3 in druge klonirane linije niso proizvajale tumorskega nekroznega faktorja alfa (TNFα) niti spontano niti po pro-vnetni stimulaciji, kar poudarja posebno lastnost človeških embrionalnih mikroglij.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo