HMC3 Hücreleri

Human Microglial Clone 3 (HMC3) hücre hattı 1995 yılında Profesör Tardieu'nun ekibi tarafından, 8 ila 12 haftalık embriyolardan elde edilen insan omurilik ve kortikal dokularından alınan mikroglial hücrelerin SV40'a bağlı olarak ölümsüzleştirilmesi yoluyla geliştirilmiştir. Yavaş bölünme ve karmaşık morfolojilerle karakterize edilen bu birincil hücreler, ölümsüzleştirilmeden önce başlangıçta 10-15 gün boyunca kültürlendi. HMC3 hücreleri, CD68, CD11b ve CD14 gibi miyeloid belirteçlerin çeşitli ekspresyonu gibi primer mikrogliaların birkaç temel özelliğini korumuştur, ancak ekspresyon seviyeleri, özellikle CD68 için primer antikor seçimine göre önemli ölçüde değişmiştir.

İmmortalizasyonun ardından HMC3 hücreleri, birincil muadillerinin birçok fenotipik ve morfolojik özelliğini korurken, 24 ila 48 saat arasında iki katına çıkma süreleriyle gelişmiş proliferasyon oranları sergilemiştir. Özellikle, CD68 EBM/11-pozitif hücrelerin oranı daha yüksekti ve birincil hücrelere kıyasla fagositik aktivitede azalma vardı. Antijenik ifadedeki kararlılık 35 pasaj boyunca doğrulanmış, hücreler NSE, CD68 ve CD11b için pozitif kalırken, temel koşullar altında CD14, MHCII ve CD4 için negatif olmuştur. Bununla birlikte, interferon-γ'ya (IFNγ) maruz kalma MHCII ifadesini yükselterek aynı tedaviye verilen birincil kültür yanıtlarıyla daha yakın bir uyum sağlamıştır.

İşlevsel olarak, HMC3 hattı diğer klonlara kıyasla bazal koşullar altında daha yüksek seviyelerde interlökin-6 (IL-6) üreterek kendini göstermiştir. Buna rağmen, metodolojik farklılıklar nedeniyle birincil mikroglial hücrelerin sitokin üretimiyle doğrudan bir karşılaştırma yapmak zor olmaya devam etmektedir. Bu ölümsüzleştirilmiş hatlarda lipopolisakkarit (LPS) uyarımına verilen yanıt birincil kültürlere göre azalmış görünmektedir. Birincil mikroglial özelliklerle tutarlı olarak, HMC3 ve diğer klonlanmış hatlar, ne kendiliğinden ne de pro-inflamatuar stimülasyonun ardından tümör nekroz faktörü-alfa (TNFα) üretmemiş ve insan embriyonik mikroglialarının spesifik bir özelliğini vurgulamıştır.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın