HMC3 ląstelės

1995 m. profesoriaus Tardieu komanda sukūrė žmogaus mikroglijos klono 3 (HMC3) ląstelių liniją, nuo SV40 priklausomai imortalizuodama mikroglijos ląsteles iš žmogaus nugaros smegenų ir žievės audinių, gautų iš 8-12 savaičių amžiaus embrionų. Šios pirminės lėtai besidalijančios ir sudėtingos morfologijos ląstelės prieš imortalizaciją iš pradžių buvo auginamos 10-15 dienų. HMC3 ląstelės išlaikė keletą pagrindinių pirminių mikroglijų požymių, pavyzdžiui, įvairias mieloidinių žymenų, tokių kaip CD68, CD11b ir CD14, raiškas, nors raiškos lygis labai skyrėsi priklausomai nuo pasirinkto pirminio antikūno, ypač CD68.

Po imortalizacijos HMC3 ląstelės pasižymėjo didesniu proliferacijos greičiu, o jų padvigubėjimo trukmė buvo 24-48 valandos, kartu išsaugant daugelį fenotipinių ir morfologinių pirminių ląstelių savybių. Visų pirma, palyginti su pirminėmis ląstelėmis, jose buvo daugiau CD68 EBM/11 teigiamų ląstelių ir sumažėjo fagocitinis aktyvumas. Antigeninės raiškos stabilumas buvo patvirtintas per 35 ciklus, kai ląstelės išliko teigiamos NSE, CD68 ir CD11b, bet neigiamos CD14, MHCII ir CD4, esant pradinėms sąlygoms. Tačiau veikiant interferonu-γ (IFNγ) padidėjo MHCII raiška, o tai labiau atitiko pirminių kultūrų atsaką į tą patį gydymą.

Funkciniu požiūriu HMC3 linija išsiskyrė tuo, kad bazinėmis sąlygomis gamino didesnį interleukino-6 (IL-6) kiekį, palyginti su kitais klonais. Nepaisant to, tiesioginis palyginimas su pirminių mikroglijos ląstelių citokinų gamyba išlieka sudėtingas dėl metodologinių skirtumų. Šių imortalizuotų linijų atsakas į lipopolisacharido (LPS) stimuliaciją, palyginti su pirminėmis kultūromis, pasirodė sumažėjęs. Atsižvelgiant į pirminių mikroglijų savybes, HMC3 ir kitos klonuotos linijos negamino naviko nekrozės faktoriaus alfa (TNFα) nei spontaniškai, nei po prouždegiminės stimuliacijos, o tai rodo specifinį žmogaus embrioninių mikroglijų bruožą.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime