HMC3 sejtek

A Human Microglial Clone 3 (HMC3) sejtvonalat 1995-ben fejlesztette ki Tardieu professzor csoportja a 8-12 hetes embriókból nyert emberi gerincvelő- és agykérgi szövetekből származó mikrogliasejtek SV40-függő immortalizációjával. Ezeket a lassú osztódással és összetett morfológiával jellemezhető primer sejteket kezdetben 10-15 napig tenyésztették az immortalizálás előtt. A HMC3 sejtek megtartották a primer mikroglia számos kulcsfontosságú jellemzőjét, például a myeloid markerek, mint a CD68, CD11b és CD14 változatos expresszióját, bár az expressziós szintek jelentősen változtak a primer antitest kiválasztásától függően, különösen a CD68 esetében.

Az immortalizációt követően a HMC3 sejtek fokozott proliferációs rátát mutattak, 24 és 48 óra közötti megduplázódási idővel, miközben megőrizték primer társaik számos fenotípusos és morfológiai jellemzőjét. Különösen a CD68 EBM/11-pozitív sejtek aránya volt magasabb, és csökkent a fagocitikus aktivitás az elsődleges sejtekhez képest. Az antigén-expresszió stabilitását 35 passzázson keresztül igazolták, a sejtek pozitívak maradtak NSE, CD68 és CD11b, de negatívak CD14, MHCII és CD4 tekintetében a kiindulási körülmények között. Az interferon-γ (IFNγ) expozíció azonban megemelte az MHCII expresszióját, ami jobban illeszkedik az ugyanerre a kezelésre adott primer tenyészválaszokhoz.

Funkcionálisan a HMC3 vonal azzal tűnt ki, hogy a többi klónhoz képest magasabb interleukin-6 (IL-6) szintet termelt bázis körülmények között. Ennek ellenére a primer mikroglia sejtek citokintermelésével való közvetlen összehasonlítás a módszertani különbségek miatt továbbra is kihívást jelent. A lipopoliszacharid (LPS) stimulációra adott válasz ezekben az immortalizált vonalakban csökkentnek tűnt a primer kultúrákhoz képest. A primer mikroglia jellemzőivel összhangban a HMC3 és más klónozott vonalak nem termeltek tumor nekrózis faktor-alfa-t (TNFα) sem spontán, sem pro-inflammatorikus stimulációt követően, kiemelve a humán embrionális mikroglia egy sajátos tulajdonságát.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban