Κύτταρα HMC3

Η κυτταρική σειρά Human Microglial Clone 3 (HMC3) αναπτύχθηκε το 1995 από την ομάδα του καθηγητή Tardieu μέσω της SV40-εξαρτώμενης αθανασίας μικρογλοιακών κυττάρων από ανθρώπινους ιστούς του νωτιαίου μυελού και του φλοιού, που προέρχονταν από έμβρυα ηλικίας 8 έως 12 εβδομάδων. Αυτά τα πρωτογενή κύτταρα, που χαρακτηρίζονται από αργή διαίρεση και σύνθετη μορφολογία, καλλιεργήθηκαν αρχικά για 10-15 ημέρες πριν από την αθανασία. Τα κύτταρα HMC3 διατήρησαν αρκετά βασικά χαρακτηριστικά της πρωτογενούς μικρογλοίας, όπως η ποικιλόμορφη έκφραση μυελικών δεικτών όπως το CD68, το CD11b και το CD14, αν και τα επίπεδα έκφρασης διέφεραν σημαντικά ανάλογα με την επιλογή του πρωτογενούς αντισώματος, ιδίως για το CD68.

Μετά την αθανατοποίηση, τα κύτταρα HMC3 παρουσίασαν αυξημένους ρυθμούς πολλαπλασιασμού, με χρόνους διπλασιασμού μεταξύ 24 και 48 ωρών, ενώ διατήρησαν πολλά φαινοτυπικά και μορφολογικά χαρακτηριστικά των πρωτογενών ομολόγων τους. Ειδικότερα, παρατηρήθηκε υψηλότερο ποσοστό CD68 EBM/11-θετικών κυττάρων και μείωση της φαγοκυτταρικής δραστηριότητας σε σύγκριση με τα πρωτογενή κύτταρα. Η σταθερότητα της αντιγονικής έκφρασης επιβεβαιώθηκε σε 35 περάσματα, με τα κύτταρα να παραμένουν θετικά για NSE, CD68 και CD11b, αλλά αρνητικά για CD14, MHCII και CD4 υπό βασικές συνθήκες. Ωστόσο, η έκθεση σε ιντερφερόνη-γ (IFNγ) αύξησε την έκφραση του MHCII, ευθυγραμμιζόμενη περισσότερο με τις απαντήσεις της πρωτογενούς καλλιέργειας στην ίδια θεραπεία.

Λειτουργικά, η σειρά HMC3 ξεχώριζε με την παραγωγή υψηλότερων επιπέδων ιντερλευκίνης-6 (IL-6) σε βασικές συνθήκες σε σύγκριση με άλλους κλώνους. Παρόλα αυτά, η άμεση σύγκριση με την παραγωγή κυτταροκινών των πρωτογενών μικρογλοιακών κυττάρων παραμένει πρόκληση λόγω μεθοδολογικών διαφορών. Η απόκριση στη διέγερση με λιποπολυσακχαρίτη (LPS) σε αυτές τις αθάνατες σειρές εμφανίστηκε μειωμένη σε σχέση με τις πρωτογενείς καλλιέργειες. Σύμφωνα με τα χαρακτηριστικά των πρωτογενών μικρογλοιακών κυττάρων, η HMC3 και άλλες κλωνοποιημένες σειρές δεν παρήγαγαν τον παράγοντα νέκρωσης όγκων-άλφα (TNFα), είτε αυθόρμητα είτε μετά από προφλεγμονώδη διέγερση, αναδεικνύοντας ένα ειδικό χαρακτηριστικό των ανθρώπινων εμβρυϊκών μικρογλοιακών κυττάρων.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης