CMK

La lignée cellulaire CMK est un modèle de leucémie mégacaryoblastique humaine mis au point à partir d’un patient atteint du syndrome de Down chez qui une leucémie mégacaryoblastique aiguë (LMMA) avait été diagnostiquée. Ces cellules revêtent une importance particulière pour la recherche sur la différenciation mégacaryocytaire et la leucémie associée à la trisomie 21. Les cellules CMK présentent des marqueurs typiques des mégacaryocytes, tels que les glycoprotéines GPIIb/IIIa et GPIb, qui sont des composants clés des membranes plaquettaires. La présence d’une activité de la peroxydase plaquettaire (PPO), localisée dans l’enveloppe nucléaire et le réticulum endoplasmique, mais non dans l’appareil de Golgi, confirme la lignée mégacaryocytaire de ces cellules. L’analyse ultrastructurale révèle l’existence de granules cytoplasmiques ressemblant à des granules α et de membranes de démarcation, ce qui confirme davantage leur nature mégacaryocytaire.

Les cellules CMK se caractérisent par un caryotype complexe, comprenant une quasi-tétraploïdie et une translocation spécifique, der(17)t(11;17), également présente dans les cellules leucémiques d’origine du patient. Cette altération génétique relie la lignée cellulaire à l’état pathologique du patient, offrant ainsi un modèle fiable pour l’étude de la pathogenèse de la LMA-CMK. De plus, la lignée cellulaire CMK peut répondre à des facteurs de croissance hématopoïétiques tels que l’interleukine-3 (IL-3) et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes et de macrophages (GM-CSF), qui stimulent la prolifération et la différenciation en formes mégacaryocytaires plus matures. Le traitement par des agents tels que l’ester de phorbol (TPA) renforce l’expression des marqueurs mégacaryocytaires et induit des changements morphologiques, notamment une segmentation cytoplasmique ressemblant à la formation des plaquettes. Ces caractéristiques font de la lignée CMK un outil précieux pour étudier le développement de la lignée mégacaryocytaire, les effets de la trisomie 21 sur l’hématopoïèse et les mécanismes de la leucémogenèse dans le syndrome de Down.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.