CMK

La linea cellulare CMK è un modello di leucemia megacarioblastica umana derivato da un paziente affetto da sindrome di Down a cui era stata diagnosticata una leucemia megacarioblastica acuta (AMKL). Queste cellule rivestono un ruolo significativo nella ricerca sulla differenziazione megacariocitica e sulla leucemia associata alla trisomia 21. Le cellule CMK presentano marcatori tipici dei megacariociti, quali le glicoproteine GPIIb/IIIa e GPIb, che sono componenti chiave delle membrane piastriniche. La presenza di attività della perossidasi piastrinica (PPO), localizzata nell’involucro nucleare e nel reticolo endoplasmatico ma non nell’apparato di Golgi, conferma il lignaggio megacariocitico di queste cellule. L’analisi ultrastrutturale rivela l’esistenza di granuli citoplasmatici simili ai granuli α e di membrane di demarcazione, a ulteriore conferma della loro natura megacariocitica.

Le cellule CMK sono caratterizzate da un cariotipo complesso, che include una quasi-tetraploidia e una traslocazione specifica, der(17)t(11;17), presente anche nelle cellule leucemiche originali del paziente. Questa alterazione genetica ricollega la linea cellulare allo stato patologico del paziente, fornendo un modello affidabile per lo studio della patogenesi dell’AMKL. Inoltre, la linea cellulare CMK è in grado di rispondere a fattori di crescita ematopoietici quali l’interleuchina-3 (IL-3) e il fattore stimolante le colonie di granulociti e macrofagi (GM-CSF), che ne stimolano la proliferazione e la differenziazione in forme megacariocitiche più mature. Il trattamento con agenti come l’estere di forbol (TPA) potenzia l’espressione dei marcatori megacariocitici e induce cambiamenti morfologici, tra cui la segmentazione citoplasmatica simile alla formazione piastrinica. Queste caratteristiche rendono la linea cellulare CMK uno strumento prezioso per lo studio dello sviluppo del lignaggio megacariocitario, degli effetti della trisomia 21 sull’emopoiesi e dei meccanismi della leucemogenesi nella sindrome di Down.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia