CMK

CMK-cellelinjen er en modell for human megakaryoblastisk leukemi, etablert fra en pasient med Downs syndrom som fikk diagnosen akutt megakaryoblastisk leukemi (AMKL). Disse cellene er viktige for forskning på megakaryocytisk differensiering og leukemi assosiert med trisomi 21. CMK-celler viser markører som er typiske for megakaryocytter, slik som glykoproteinene GPIIb/IIIa og GPIb, som er nøkkelkomponenter i blodplate-membranene. Tilstedeværelsen av blodplateperoksidase (PPO)-aktivitet, lokalisert til kjernemembranen og det endoplasmatiske retikulumet, men ikke til Golgi-apparatet, bekrefter den megakaryocytiske avstamningen til disse cellene. Ultrastrukturell analyse avslører eksistensen av cytoplasmatiske granuler som ligner α-granuler og avgrensningsmembraner, noe som ytterligere bekrefter deres megakaryocytiske natur.

CMK-celler er preget av en kompleks karyotype, inkludert nær-tetraploidi og en spesifikk translokasjon, der(17)t(11;17), som også finnes i pasientens opprinnelige leukemiceller. Denne genetiske endringen knytter cellelinjen tilbake til sykdomstilstanden hos pasienten, og gir en pålitelig modell for å studere AMKL-patogenesen. I tillegg kan CMK-cellelinjen reagere på hematopoietiske vekstfaktorer som interleukin-3 (IL-3) og granulocytt-makrofag-kolonistimulerende faktor (GM-CSF), som stimulerer proliferasjon og differensiering til mer modne megakaryocytiske former. Behandling med midler som forbolester (TPA) forsterker uttrykket av megakaryocytiske markører og induserer morfologiske endringer, inkludert cytoplasmatisk segmentering som ligner blodplate-dannelse. Disse egenskapene gjør CMK til et verdifullt verktøy for å undersøke utviklingen av den megakaryocytiske linjen, effektene av trisomi 21 på hematopoiesen og mekanismene bak leukemogenesen ved Downs syndrom.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring