Skip to content
CMK
Tissue
דם היקפי
Disease
לוקמיה מיאלואידית הקשורה לתסמונת דאון

Documents

CMK

Cell line · Product number 305533

The CMK cell line is a human megakaryoblastic leukemia model established from a Down syndrome patient diagnosed with acute megakaryoblastic leukemia (AMKL...

US$375.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

קו התאים CMK הוא מודל של לוקמיה מגקריובלסטית אנושית, שהוקם מתא של חולה בתסמונת דאון שאובחן כסובל מלוקמיה מגקריובלסטית חריפה (AMKL). לתאים אלה חשיבות רבה במחקר על התמיינות מגקריוציטית ולוקמיה הקשורה לטריזומיה 21. תאי CMK מציגים סמנים האופייניים למגקריוציטים, כגון הגליקופרוטאינים GPIIb/IIIa ו-GPIb, המהווים מרכיבים מרכזיים בקרומי הטסיות. נוכחות פעילות פרוקסידאז טסיות (PPO), הממוקמת במעטפת הגרעין וברטיקולום האנדופלזמי אך לא במנגנון גולגי, מאשרת את השושלת המגקריוציטית של תאים אלה. ניתוח אולטרא-מבני מגלה את קיומם של גרגרים ציטופלזמיים הדומים לגרגרי α וממברנות תיחום, מה שמאשש עוד יותר את אופיין המגקריוציטי.

תאי CMK מאופיינים בקריוטיפ מורכב, הכולל כמעט טטרפלואידיות וטרנסלוקציה ספציפית, der(17)t(11;17), הנמצאת גם בתאי הלוקמיה המקוריים של המטופל. שינוי גנטי זה מקשר את קו התאים חזרה למצב המחלה אצל המטופל, ומספק מודל אמין לחקר הפתוגנזה של AMKL. בנוסף, קו התאים CMK יכול להגיב לגורמי גדילה המטופויטיים כגון אינטרלוקין-3 (IL-3) וגורם מגרה מושבות גרנולוציטים-מקרופאגים (GM-CSF), הממריצים התרבות והתמיינות לצורות מגקריוציטיות בוגרות יותר. טיפול בחומרים כגון אסתר פורבול (TPA) מגביר את הביטוי של סמנים מגקריוציטיים ומביא לשינויים מורפולוגיים, כולל פילוח ציטופלזמי הדומה להיווצרות טסיות דם. תכונות אלו הופכות את CMK לכלי חשוב לחקר התפתחות השושלת המגקריוציטית, השפעות הטריזומיה 21 על ההמטופויזיס, והמנגנונים של היווצרות לוקמיה בתסמונת דאון.

Tissue
דם היקפי
Disease
לוקמיה מיאלואידית הקשורה לתסמונת דאון

02Classification

Organism
Human
Sex
Male
Growth properties
Suspension
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
CMK (מספר קטלוג של Cytion: 305533)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_0216

04Expression and susceptibility

Mutational profile
מוטציה: TP53, p.Asp49His (c.145G>C), הטרוזיגוטית; מיזוג גנים: TP53-FXR2

05Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 20% FBS
Subculturing
אסוף את תאי התרחיף בצינור של 15 מ"ל ושטוף בעדינות את התאים הנצמדים עם PBS ללא סידן ומגנזיום (השתמש ב-3-5 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-5-10 מ"ל עבור בקבוקי T75). החל Accutase (1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25, 2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75) תוך הקפדה על כיסוי מלא של שכבת התאים. אפשר לתאים להתפתח בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר ההתפתחות, שלב וצנטריפוג את התאים המרחפים והדבוקים. לאחר הצנטריפוגה, השב בזהירות את משקע התאים והעבר את תמיסת התאים לבקבוקים חדשים המכילים מדיום טרי.
Seeding density
3–5 × 10⁵/מ"ל
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

07Donor

Donor age
10 חודשים
Ethnicity
יפנית