ImWilms10T

La lignée cellulaire imWilms10T est une variante immortalisée de la lignée cellulaire tumorale primaire Wilms10T, dérivée d’un échantillon de tumeur de Wilms (néphroblastome) prélevé chez un enfant. Cette lignée cellulaire se caractérise par une délétion homozygote du gène WT1, entraînant une perte complète de la fonction de la protéine WT1. Le gène WT1 joue un rôle crucial dans le développement rénal, et sa délétion dans la lignée imWilms10T reflète une perturbation génétique grave associée à la pathogenèse de la tumeur de Wilms. Outre la délétion du gène WT1, les cellules imWilms10T présentent une perte d’hétérozygotie (LOH) dans la région chromosomique 11p15, qui comprend des gènes clés tels que l’IGF2, contribuant au comportement agressif de la tumeur.

Afin de pallier la durée de vie limitée des cellules Wilms10T, la lignée cellulaire imWilms10T a été établie en introduisant un antigène T de grande taille SV40 triple mutant (U19dl89-97tsA58) dans les cellules tumorales d’origine. Ce processus d’immortalisation permet aux cellules imWilms10T de proliférer indéfiniment tout en conservant leur stabilité chromosomique, offrant ainsi un modèle fiable pour des études à long terme. Les cellules imWilms10T conservent les caractéristiques essentielles de la lignée parentale Wilms10T, notamment la perte complète du gène WT1 et la présence d’une perte hétérozygotique (LOH) au niveau de 11p15, ce qui en fait une ressource inestimable pour l’étude des conséquences moléculaires de la délétion du gène WT1 et des processus tumorigènes associés.

Les cellules imWilms10T ont fait l’objet d’études approfondies en raison de leur implication dans des voies de signalisation clés qui régissent la progression tumorale. Des analyses protéomiques ont révélé que ces cellules présentent une phosphorylation et une activation de plusieurs récepteurs tyrosine kinases (RTK), tels que l’IGF1R, le PDGFRβ et l’AXL. Ces récepteurs activés transmettent des signaux par le biais de voies en aval, notamment les voies MAPK et PI3K/AKT, qui sont cruciales pour le maintien du phénotype malin des cellules. La lignée cellulaire imWilms10T constitue un outil important pour étudier l’impact de la perte complète du gène WT1 sur la signalisation cellulaire, la croissance tumorale et les cibles thérapeutiques potentielles dans la tumeur de Wilms, en particulier pour les sous-types tumoraux plus agressifs.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.