ImWilms10T

إن خط خلايا imWilms10T هو سلالة خلوية غير خالدة من خط خلايا ورم ويلمز10T الأولي، والذي تم اشتقاقه من عينة ورم ويلمز (ورم أرومي كلوي) لدى مريض أطفال. يتميز هذا الخط الخلوي بحذف متماثل الزيجوت لجين WT1، مما يؤدي إلى فقدان كامل لوظيفة بروتين WT1. ويُعد WT1 جيناً حاسماً لنمو الكلى، ويعكس حذفه في imWilms10T اضطراباً وراثياً شديداً يرتبط بالتسبب في الإصابة بورم ويلمز. بالإضافة إلى حذف الجين WT1، تُظهر خلايا imWilms10T فقدان التغاير في المنطقة الصبغية 11p15، والتي تتضمن جينات رئيسية مثل IGF2، مما يساهم في السلوك العدواني للورم.

وللتغلب على العمر المحدود لخلايا ويلمز10T، تم إنشاء خط خلايا imWilms10T عن طريق إدخال مستضد SV40 T الكبير ثلاثي الطفرات (U19dl89-97tsA58) في خلايا الورم الأصلية. تُمكِّن عملية التخليد هذه خلايا imWilms10T من التكاثر إلى أجل غير مسمى مع الحفاظ على استقرار الكروموسومات، وبالتالي توفير نموذج موثوق به للدراسات طويلة الأمد. تحتفظ خلايا imWilms10T بخصائص خط ويلمز10T الأبوي الحرجة، بما في ذلك الفقدان الكامل ل WT1 ووجود خلل في النسيج الصبغي عند 11p15، مما يجعلها مورداً لا يقدر بثمن لدراسة العواقب الجزيئية لحذف WT1 والعمليات الورمية المرتبطة به.

دُرست خلايا imWilms10T على نطاق واسع لمشاركتها في مسارات الإشارات الرئيسية التي تدفع تطور الورم. وقد كشفت التحليلات البروتينية أن هذه الخلايا تُظهر فسفرة وتفعيل العديد من مستقبلات التيروزين كيناز (RTKs)، مثل IGF1R وPDGFRβ وAXL. تشير هذه المستقبلات المنشطة من خلال مسارات المصب، بما في ذلك مسارات MAPK وPI3K/AKT، والتي تعتبر حاسمة للحفاظ على النمط الظاهري الخبيث للخلايا. يُستخدم خط خلايا imWilms10T كأداة مهمة لدراسة تأثير فقدان WT1 الكامل على الإشارات الخلوية ونمو الورم والأهداف العلاجية المحتملة في ورم ويلمز، خاصةً بالنسبة للأنواع الفرعية الأكثر عدوانية من الأورام.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان