ImWilms10T

Die imWilms10T-Zelllinie ist eine immortalisierte Variante der primären Wilms10T-Tumorzelllinie, die aus einer Wilms-Tumorprobe (Nephroblastom) eines pädiatrischen Patienten gewonnen wurde. Diese Zelllinie zeichnet sich durch eine homozygote Deletion des WT1-Gens aus, was zu einem vollständigen Verlust der WT1-Proteinfunktion führt. WT1 ist ein entscheidendes Gen für die Nierenentwicklung, und seine Deletion in imWilms10T spiegelt eine schwere genetische Störung wider, die mit der Pathogenese des Wilms-Tumors in Verbindung gebracht wird. Zusätzlich zur WT1-Deletion weisen imWilms10T-Zellen einen Verlust an Heterozygotie (LOH) in der chromosomalen Region 11p15 auf, die Schlüsselgene wie IGF2 enthält und zum aggressiven Verhalten des Tumors beiträgt.

Um die begrenzte Lebensdauer der Wilms10T-Zellen zu überwinden, wurde die imWilms10T-Zelllinie durch die Einführung eines dreifach mutierten SV40 Large T Antigens (U19dl89-97tsA58) in die ursprünglichen Tumorzellen hergestellt. Dieser Immortalisierungsprozess ermöglicht es den imWilms10T-Zellen, sich unbegrenzt zu vermehren und dabei die Chromosomenstabilität zu erhalten, so dass sie ein zuverlässiges Modell für Langzeitstudien darstellen. Die imWilms10T-Zellen behalten die kritischen Merkmale der elterlichen Wilms10T-Linie bei, einschließlich des vollständigen Verlusts von WT1 und des Vorhandenseins von LOH bei 11p15, was sie zu einer unschätzbaren Ressource für die Untersuchung der molekularen Folgen der WT1-Deletion und der damit verbundenen tumorerzeugenden Prozesse macht.

imWilms10T-Zellen wurden eingehend auf ihre Beteiligung an wichtigen Signalwegen untersucht, die die Tumorprogression vorantreiben. Proteomanalysen haben gezeigt, dass diese Zellen eine Phosphorylierung und Aktivierung mehrerer Rezeptortyrosinkinasen (RTKs), wie IGF1R, PDGFRβ und AXL, aufweisen. Diese aktivierten Rezeptoren signalisieren über nachgeschaltete Wege, einschließlich der MAPK- und PI3K/AKT-Wege, die für die Aufrechterhaltung des bösartigen Phänotyps der Zellen entscheidend sind. Die imWilms10T-Zelllinie dient als wichtiges Instrument zur Untersuchung der Auswirkungen eines vollständigen WT1-Verlusts auf die zelluläre Signalübertragung, das Tumorwachstum und potenzielle therapeutische Ziele bei Wilms-Tumoren, insbesondere bei aggressiveren Tumorsubtypen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung