ImWilms10T

Cellinjen imWilms10T är en odödliggjord variant av den primära tumörcellinjen Wilms10T, som härrör från ett prov från en Wilms-tumör (nefroblastom) hos en pediatrisk patient. Denna cellinje kännetecknas av en homozygot deletion av WT1-genen, vilket resulterar i en fullständig förlust av WT1-proteinets funktion. WT1 är en gen som är avgörande för njurarnas utveckling och dess deletion i imWilms10T återspeglar en allvarlig genetisk störning som är förknippad med patogenesen för Wilms tumör. Utöver WT1-deletionen uppvisar imWilms10T-cellerna förlust av heterozygoti (LOH) i kromosomregion 11p15, som inkluderar nyckelgener som IGF2, vilket bidrar till tumörens aggressiva beteende.

För att övervinna Wilms10T-cellernas begränsade livslängd etablerades cellinjen imWilms10T genom att införa en trippelmutant SV40 large T-antigen (U19dl89-97tsA58) i de ursprungliga tumörcellerna. Denna odödlighetsprocess gör det möjligt för imWilms10T-cellerna att föröka sig på obestämd tid med bibehållen kromosomstabilitet, vilket ger en tillförlitlig modell för långtidsstudier. ImWilms10T-cellerna bibehåller de kritiska egenskaperna hos Wilms10T-föräldralinjen, inklusive den fullständiga förlusten av WT1 och förekomsten av LOH vid 11p15, vilket gör dem till en ovärderlig resurs för att studera de molekylära konsekvenserna av WT1-deletion och de associerade tumörframkallande processerna.

imWilms10T-celler har studerats ingående för sin inblandning i viktiga signalvägar som driver tumörprogression. Proteomiska analyser har visat att dessa celler uppvisar fosforylering och aktivering av flera receptortyrosinkinaser (RTK), såsom IGF1R, PDGFRβ och AXL. Dessa aktiverade receptorer signalerar genom nedströmsvägar, inklusive MAPK- och PI3K/AKT-vägarna, som är avgörande för att upprätthålla cellernas maligna fenotyp. Cellinjen imWilms10T är ett viktigt verktyg för att undersöka effekterna av fullständig WT1-förlust på cellsignalering, tumörtillväxt och potentiella terapeutiska mål i Wilms tumör, särskilt för mer aggressiva tumörundertyper.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring