ImWilms10T

La linea cellulare imWilms10T è una variante immortalizzata della linea cellulare tumorale primaria Wilms10T, derivata da un campione di tumore di Wilms (nefroblastoma) di un paziente pediatrico. Questa linea cellulare è caratterizzata da una delezione omozigote del gene WT1, con conseguente perdita completa della funzione della proteina WT1. WT1 è un gene cruciale per lo sviluppo del rene e la sua delezione in imWilms10T riflette una grave alterazione genetica associata alla patogenesi del tumore di Wilms. Oltre alla delezione di WT1, le cellule imWilms10T presentano una perdita di eterozigosi (LOH) nella regione cromosomica 11p15, che include geni chiave come IGF2, contribuendo al comportamento aggressivo del tumore.

Per superare la durata limitata delle cellule Wilms10T, è stata creata la linea cellulare imWilms10T introducendo un triplo mutante dell'antigene SV40 large T (U19dl89-97tsA58) nelle cellule tumorali originali. Questo processo di immortalizzazione consente alle cellule imWilms10T di proliferare indefinitamente mantenendo la stabilità cromosomica, fornendo così un modello affidabile per studi a lungo termine. Le cellule imWilms10T mantengono le caratteristiche critiche della linea Wilms10T parentale, tra cui la perdita completa di WT1 e la presenza di LOH a 11p15, che le rendono una risorsa inestimabile per lo studio delle conseguenze molecolari della delezione di WT1 e dei processi tumorigenici associati.

le cellule imWilms10T sono state ampiamente studiate per il loro coinvolgimento in vie di segnalazione chiave che guidano la progressione tumorale. Le analisi proteomiche hanno rivelato che queste cellule presentano la fosforilazione e l'attivazione di diverse tirosin-chinasi recettoriali (RTK), come IGF1R, PDGFRβ e AXL. Questi recettori attivati segnalano attraverso vie a valle, tra cui le vie MAPK e PI3K/AKT, che sono cruciali per il mantenimento del fenotipo maligno delle cellule. La linea cellulare imWilms10T è uno strumento importante per studiare l'impatto della perdita completa di WT1 sulla segnalazione cellulare, sulla crescita tumorale e sui potenziali bersagli terapeutici del tumore di Wilms, in particolare per i sottotipi tumorali più aggressivi.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia