ImWilms10T

La línea celular imWilms10T es una variante inmortalizada de la línea celular tumoral primaria Wilms10T, derivada de una muestra de tumor de Wilms (nefroblastoma) de un paciente pediátrico. Esta línea celular se caracteriza por una deleción homocigótica del gen WT1, lo que provoca una pérdida total de la función de la proteína WT1. El gen WT1 es fundamental para el desarrollo renal, y su deleción en imWilms10T refleja una alteración genética grave asociada a la patogénesis del tumor de Wilms. Además de la deleción de WT1, las células imWilms10T presentan pérdida de heterocigosidad (LOH) en la región cromosómica 11p15, que incluye genes clave como el IGF2, lo que contribuye al comportamiento agresivo del tumor.

Para superar la vida útil limitada de las células Wilms10T, se estableció la línea celular imWilms10T mediante la introducción de un antígeno T grande de SV40 con triple mutación (U19dl89-97tsA58) en las células tumorales originales. Este proceso de inmortalización permite que las células imWilms10T proliferen indefinidamente mientras mantienen la estabilidad cromosómica, lo que proporciona un modelo confiable para estudios a largo plazo. Las células imWilms10T conservan las características fundamentales de la línea parental Wilms10T, incluida la pérdida total de WT1 y la presencia de pérdida de heterocigosis (LOH) en 11p15, lo que las convierte en un recurso invaluable para estudiar las consecuencias moleculares de la deleción de WT1 y los procesos tumorigénicos asociados.

Las células imWilms10T han sido ampliamente estudiadas por su participación en vías de señalización clave que impulsan la progresión tumoral. Los análisis proteómicos han revelado que estas células presentan fosforilación y activación de varios receptores de tirosina quinasa (RTK), como IGF1R, PDGFRβ y AXL. Estos receptores activados transmiten señales a través de vías posteriores, incluidas las vías MAPK y PI3K/AKT, que son cruciales para mantener el fenotipo maligno de las células. La línea celular imWilms10T sirve como una herramienta importante para investigar el impacto de la pérdida completa de WT1 en la señalización celular, el crecimiento tumoral y las posibles dianas terapéuticas en el tumor de Wilms, particularmente para los subtipos tumorales más agresivos.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.