ImWilms10T

Az imWilms10T sejtvonal a Wilms10T primer tumorsejtvonal immortalizált változata, amely egy gyermekbeteg Wilms-tumor (nefroblastoma) mintájából származik. Ezt a sejtvonalat a WT1 gén homozigóta deléciója különbözteti meg, ami a WT1 fehérje funkciójának teljes elvesztését eredményezi. A WT1 a vese fejlődése szempontjából kulcsfontosságú gén, és deléciója az imWilms10T-ben olyan súlyos genetikai zavart tükröz, amely összefügg a Wilms-tumor patogenezisével. A WT1 deléció mellett az imWilms10T sejtek heterozigozitásvesztést (LOH) mutatnak a 11p15 kromoszómarégióban, amely olyan kulcsfontosságú géneket tartalmaz, mint az IGF2, ami hozzájárul a tumor agresszív viselkedéséhez.

A Wilms10T sejtek korlátozott élettartamának leküzdése érdekében az imWilms10T sejtvonalat úgy hozták létre, hogy az eredeti tumorsejtekbe egy háromszorosan mutáns SV40 nagy T antigént (U19dl89-97tsA58) vittek be. Ez az immortalizációs folyamat lehetővé teszi, hogy az imWilms10T sejtek korlátlanul szaporodjanak, miközben megőrzik a kromoszóma-stabilitást, ezáltal megbízható modellt biztosítanak a hosszú távú vizsgálatokhoz. Az imWilms10T sejtek megőrzik a szülői Wilms10T vonal kritikus jellemzőit, beleértve a WT1 teljes elvesztését és a 11p15-ös LOH jelenlétét, így felbecsülhetetlen értékű forrássá válnak a WT1 deléció molekuláris következményeinek és a kapcsolódó tumorogén folyamatok tanulmányozásához.

az imWilms10T sejteket széles körben tanulmányozták a tumorprogressziót irányító kulcsfontosságú jelátviteli útvonalakban való részvételük szempontjából. Proteomikai elemzések kimutatták, hogy ezek a sejtek számos receptor-tirozin-kináz (RTK), például az IGF1R, PDGFRβ és AXL foszforilációját és aktiválódását mutatják. Ezek az aktivált receptorok a downstream útvonalakon keresztül jeleznek, beleértve a MAPK és a PI3K/AKT útvonalakat, amelyek kulcsfontosságúak a sejtek rosszindulatú fenotípusának fenntartásában. Az imWilms10T sejtvonal fontos eszközként szolgál a WT1 teljes elvesztésének a sejtek jelátvitelére, a tumor növekedésére és a Wilms-tumor potenciális terápiás célpontjaira gyakorolt hatásának vizsgálatához, különösen az agresszívabb tumor altípusok esetében.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban