ImWilms10T

ImWilms10T-cellelinjen er en udødeliggjort variant af den primære Wilms10T-tumorcellelinje, som stammer fra en Wilms-tumorprøve (nefroblastom) fra en pædiatrisk patient. Denne cellelinje er kendetegnet ved en homozygot deletion af WT1-genet, hvilket resulterer i et fuldstændigt tab af WT1-proteinfunktion. WT1 er et afgørende gen for nyreudvikling, og dets deletion i imWilms10T afspejler en alvorlig genetisk forstyrrelse, der er forbundet med patogenesen af Wilms-tumor. Ud over WT1-deletionen udviser imWilms10T-celler tab af heterozygoti (LOH) i 11p15-kromosomområdet, som omfatter nøglegener som IGF2, der bidrager til tumorens aggressive adfærd.

For at overvinde Wilms10T-cellernes begrænsede levetid blev imWilms10T-cellelinjen etableret ved at indføre et tredobbelt muteret SV40 large T-antigen (U19dl89-97tsA58) i de oprindelige tumorceller. Denne udødelighedsproces gør det muligt for imWilms10T-celler at formere sig på ubestemt tid og samtidig bevare kromosomstabiliteten, hvilket giver en pålidelig model til langtidsstudier. ImWilms10T-cellerne bevarer de kritiske egenskaber ved Wilms10T-forældrelinjen, herunder det fuldstændige tab af WT1 og tilstedeværelsen af LOH på 11p15, hvilket gør dem til en uvurderlig ressource til undersøgelse af de molekylære konsekvenser af WT1-deletion og de tilknyttede tumorigeniske processer.

imWilms10T-celler er blevet grundigt undersøgt for deres involvering i vigtige signalveje, der driver tumorprogression. Proteomiske analyser har afsløret, at disse celler udviser fosforylering og aktivering af flere receptortyrosinkinaser (RTK'er), såsom IGF1R, PDGFRβ og AXL. Disse aktiverede receptorer signalerer gennem downstream-veje, herunder MAPK- og PI3K/AKT-vejene, som er afgørende for at opretholde cellernes maligne fænotype. Cellelinjen imWilms10T er et vigtigt redskab til at undersøge virkningen af et fuldstændigt tab af WT1 på cellulær signalering, tumorvækst og potentielle terapeutiske mål i Wilms-tumor, især for mere aggressive tumorundertyper.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring