ImWilms10T

ImWilms10T šūnu līnija ir Wilms10T primārās audzēja šūnu līnijas imortizēts variants, kas iegūts no Wilms audzēja (nefroblastomas) parauga pediatriskā pacienta organismā. Šī šūnu līnija atšķiras ar homozigotisku WT1 gēna deleciju, kā rezultātā pilnībā tiek zaudēta WT1 proteīna funkcija. WT1 ir svarīgs gēns nieru attīstībai, un tā izdzēšana imWilms10T atspoguļo nopietnu ģenētisku traucējumu, kas saistīts ar Vilmsa audzēja patoģenēzi. Papildus WT1 delecijai imWilms10T šūnām ir arī heterozigotozitātes zudums (LOH) 11p15 hromosomu apgabalā, kurā ietilpst tādi svarīgi gēni kā IGF2, kas veicina audzēja agresīvu uzvedību.

Lai pārvarētu Wilms10T šūnu ierobežoto dzīves ilgumu, tika izveidota imWilms10T šūnu līnija, ieviešot sākotnējās audzēja šūnās trīskāršu mutantu SV40 lielo T antigēnu (U19dl89-97tsA58). Šis imortalizācijas process ļauj imWilms10T šūnām vairoties neierobežoti ilgi, vienlaikus saglabājot hromosomu stabilitāti, tādējādi nodrošinot uzticamu modeli ilgtermiņa pētījumiem. ImWilms10T šūnas saglabā vecāku Wilms10T līnijas kritiskās īpašības, tostarp pilnīgu WT1 zudumu un LOH klātbūtni 11p15, padarot tās par nenovērtējamu resursu WT1 delecijas un ar to saistīto audzēja veidošanās procesu molekulāro seku pētīšanai.

imWilms10T šūnas ir plaši pētītas saistībā ar to iesaistīšanos galvenajos signālu ceļos, kas veicina audzēju progresēšanu. Proteomiskās analīzes ir atklājušas, ka šajās šūnās fosforilē un aktivizējas vairākas receptoru tirozīna kināzes (RTK), piemēram, IGF1R, PDGFRβ un AXL. Šie aktivizētie receptori signalizē caur pakārtotajiem ceļiem, tostarp MAPK un PI3K/AKT ceļiem, kas ir būtiski šūnu ļaundabīgā fenotipa uzturēšanai. ImWilms10T šūnu līnija kalpo kā svarīgs instruments, lai pētītu pilnīgu WT1 zuduma ietekmi uz šūnu signalizāciju, audzēja augšanu un potenciālajiem terapeitiskajiem mērķiem Vilmsa audzēja gadījumā, jo īpaši agresīvāku audzēju apakštipu gadījumā.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu