ImWilms10T

สายเซลล์ imWilms10T เป็นสายเซลล์ที่คงสภาพความเป็นอมตะซึ่งได้มาจากสายเซลล์มะเร็งปฐมภูมิ Wilms10T ที่สืบทอดมาจากตัวอย่างเนื้องอก Wilms (เนื้องอกไตของเด็ก) ในผู้ป่วยเด็ก สายเซลล์นี้มีความโดดเด่นจากการขาดยีน WT1 แบบโฮโมไซโกต ส่งผลให้สูญเสียการทำงานของโปรตีน WT1 อย่างสมบูรณ์WT1 เป็นยีนที่สำคัญอย่างยิ่งต่อการพัฒนาของไต และการลบยีนนี้ในเซลล์ imWilms10T สะท้อนให้เห็นถึงการรบกวนทางพันธุกรรมอย่างรุนแรงซึ่งเกี่ยวข้องกับพยาธิกำเนิดของเนื้องอก Wilms นอกจากความผิดปกติของการลบยีน WT1 แล้ว เซลล์ imWilms10T ยังแสดงลักษณะการสูญเสียความหลากหลายทางพันธุกรรม (LOH) ในบริเวณโครโมโซม 11p15 ซึ่งรวมถึงยีนสำคัญอย่าง IGF2 ที่ส่งผลต่อพฤติกรรมก้าวร้าวของเนื้องอก

เพื่อเอาชนะข้อจำกัดด้านอายุการใช้งานของเซลล์ Wilms10T จึงได้สร้างสายพันธุ์เซลล์ imWilms10T ขึ้นโดยการนำแอนติเจน SV40 large T แบบสามกลายพันธุ์ (U19dl89-97tsA58) เข้าสู่เซลล์เนื้องอกต้นกำเนิด กระบวนการทำให้เซลล์มีอายุยืนนี้ทำให้เซลล์ imWilms10T สามารถแบ่งตัวได้อย่างไม่จำกัดในขณะที่ยังคงความเสถียรของโครโมโซม จึงเป็นแบบจำลองที่เชื่อถือได้สำหรับการศึกษาในระยะยาวเซลล์ imWilms10T ยังคงลักษณะสำคัญต่าง ๆ ของสายพันธุ์ต้นกำเนิด Wilms10T ไว้ได้อย่างครบถ้วน รวมถึงการสูญเสียยีน WT1 อย่างสมบูรณ์และการเกิด LOH ที่ตำแหน่ง 11p15 ซึ่งทำให้เซลล์เหล่านี้เป็นทรัพยากรอันมีค่าอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาผลกระทบในระดับโมเลกุลของการลบยีน WT1 และกระบวนการก่อมะเร็งที่เกี่ยวข้อง

เซลล์ imWilms10T ได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางเกี่ยวกับการมีส่วนร่วมในเส้นทางการส่งสัญญาณที่สำคัญซึ่งขับเคลื่อนการเจริญเติบโตของเนื้องอก การวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ได้เปิดเผยว่าเซลล์เหล่านี้แสดงการฟอสโฟรีเลชันและการกระตุ้นของไทโรซีนไคเนสตัวรับหลายชนิด (RTKs) เช่น IGF1R, PDGFRβ และ AXLตัวรับที่ถูกกระตุ้นเหล่านี้ส่งสัญญาณผ่านเส้นทางที่ต่อเนื่องกัน รวมถึงเส้นทาง MAPK และ PI3K/AKT ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการคงลักษณะเซลล์มะเร็งของเซลล์เหล่านั้น สายพันธุ์เซลล์ imWilms10T ทำหน้าที่เป็นเครื่องมือสำคัญในการศึกษาผลกระทบของการสูญเสีย WT1 อย่างสมบูรณ์ต่อการส่งสัญญาณภายในเซลล์ การเจริญเติบโตของเนื้องอก และเป้าหมายการรักษาที่เป็นไปได้ในเนื้องอก Wilms โดยเฉพาะอย่างยิ่งในชนิดย่อยของเนื้องอกที่มีความรุนแรงมากขึ้น

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.