ImWilms10T

Linia komórkowa imWilms10T jest immortalizowanym wariantem linii komórkowej guza pierwotnego Wilms10T, która została uzyskana z próbki guza Wilmsa (nefroblastoma) u pacjenta pediatrycznego. Ta linia komórkowa wyróżnia się homozygotyczną delecją genu WT1, co skutkuje całkowitą utratą funkcji białka WT1. WT1 jest kluczowym genem dla rozwoju nerek, a jego delecja w imWilms10T odzwierciedla poważne zaburzenie genetyczne, które jest związane z patogenezą guza Wilmsa. Oprócz delecji WT1, komórki imWilms10T wykazują utratę heterozygotyczności (LOH) w regionie chromosomalnym 11p15, który obejmuje kluczowe geny, takie jak IGF2, przyczyniając się do agresywnego zachowania guza.

Aby przezwyciężyć ograniczoną żywotność komórek Wilms10T, utworzono linię komórkową imWilms10T poprzez wprowadzenie potrójnie zmutowanego antygenu SV40 large T (U19dl89-97tsA58) do oryginalnych komórek nowotworowych. Ten proces immortalizacji umożliwia komórkom imWilms10T proliferację w nieskończoność przy jednoczesnym zachowaniu stabilności chromosomalnej, zapewniając w ten sposób niezawodny model do badań długoterminowych. Komórki imWilms10T zachowują krytyczne cechy rodzicielskiej linii Wilms10T, w tym całkowitą utratę WT1 i obecność LOH w 11p15, co czyni je nieocenionym źródłem do badania molekularnych konsekwencji delecji WT1 i związanych z nią procesów nowotworowych.

komórki imWilms10T były intensywnie badane pod kątem ich zaangażowania w kluczowe szlaki sygnałowe, które napędzają progresję nowotworu. Analizy proteomiczne ujawniły, że komórki te wykazują fosforylację i aktywację kilku receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), takich jak IGF1R, PDGFRβ i AXL. Te aktywowane receptory sygnalizują poprzez dalsze szlaki, w tym szlaki MAPK i PI3K/AKT, które są kluczowe dla utrzymania złośliwego fenotypu komórek. Linia komórkowa imWilms10T służy jako ważne narzędzie do badania wpływu całkowitej utraty WT1 na sygnalizację komórkową, wzrost guza i potencjalne cele terapeutyczne w guzie Wilmsa, szczególnie w przypadku bardziej agresywnych podtypów guza.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym