ImWilms10T

Cellelinjen imWilms10T er en udødeliggjort variant av Wilms10T-primærtumorcellelinjen, som ble avledet fra en Wilms-svulst (nefroblastom) fra en pediatrisk pasient. Denne cellelinjen kjennetegnes av en homozygot delesjon av WT1-genet, noe som resulterer i et fullstendig tap av WT1-proteinfunksjon. WT1 er et avgjørende gen for nyreutvikling, og deletjonen i imWilms10T gjenspeiler en alvorlig genetisk forstyrrelse som er forbundet med patogenesen til Wilms-svulst. I tillegg til WT1-delesjonen har imWilms10T-celler tap av heterozygositet (LOH) i kromosomregion 11p15, som inkluderer viktige gener som IGF2, noe som bidrar til svulstens aggressive atferd.

For å overvinne Wilms10T-cellenes begrensede levetid ble imWilms10T-cellelinjen etablert ved å introdusere et trippelmutant SV40 large T-antigen (U19dl89-97tsA58) i de opprinnelige tumorcellene. Denne udødeliggjøringsprosessen gjør det mulig for imWilms10T-celler å formere seg på ubestemt tid samtidig som kromosomstabiliteten opprettholdes, noe som gir en pålitelig modell for langtidsstudier. ImWilms10T-cellene beholder de kritiske egenskapene til Wilms10T-foreldrelinjen, inkludert det fullstendige tapet av WT1 og tilstedeværelsen av LOH på 11p15, noe som gjør dem til en uvurderlig ressurs for studier av de molekylære konsekvensene av WT1-delesjon og de assosierte tumorgenetiske prosessene.

imWilms10T-celler har blitt grundig studert med tanke på deres involvering i viktige signalveier som driver tumorprogresjon. Proteomanalyser har avdekket at disse cellene viser fosforylering og aktivering av flere reseptortyrosinkinaser (RTK-er), som IGF1R, PDGFRβ og AXL. Disse aktiverte reseptorene signaliserer gjennom nedstrømsveier, inkludert MAPK- og PI3K/AKT-veiene, som er avgjørende for å opprettholde cellenes maligne fenotype. Cellelinjen imWilms10T er et viktig verktøy for å undersøke effekten av fullstendig tap av WT1 på cellulær signalering, tumorvekst og potensielle terapeutiske mål i Wilms-svulster, særlig for mer aggressive subtyper av svulster.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring