ImWilms10T

A linha de células imWilms10T é uma variante imortalizada da linha de células tumorais primárias Wilms10T, que foi derivada de uma amostra de tumor de Wilms (nefroblastoma) de um doente pediátrico. Esta linha celular distingue-se por uma deleção homozigótica do gene WT1, resultando numa perda completa da função da proteína WT1. O WT1 é um gene crucial para o desenvolvimento dos rins e a sua deleção no imWilms10T reflecte uma perturbação genética grave que está associada à patogénese do tumor de Wilms. Para além da deleção do WT1, as células imWilms10T apresentam perda de heterozigotia (LOH) na região cromossómica 11p15, que inclui genes chave como o IGF2, contribuindo para o comportamento agressivo do tumor.

Para ultrapassar o tempo de vida limitado das células Wilms10T, foi criada a linha celular imWilms10T através da introdução de um antigénio SV40 large T triplamente mutante (U19dl89-97tsA58) nas células tumorais originais. Este processo de imortalização permite que as células imWilms10T proliferem indefinidamente, mantendo a estabilidade cromossómica, proporcionando assim um modelo fiável para estudos a longo prazo. As células imWilms10T mantêm as caraterísticas críticas da linha Wilms10T parental, incluindo a perda completa de WT1 e a presença de LOH em 11p15, o que as torna um recurso inestimável para o estudo das consequências moleculares da deleção de WT1 e dos processos tumorigénicos associados.

as células imWilms10T têm sido amplamente estudadas quanto ao seu envolvimento em vias de sinalização fundamentais que conduzem à progressão tumoral. As análises proteómicas revelaram que estas células apresentam fosforilação e ativação de vários receptores tirosina-quinases (RTKs), tais como IGF1R, PDGFRβ e AXL. Estes receptores activados sinalizam através de vias a jusante, incluindo as vias MAPK e PI3K/AKT, que são cruciais para a manutenção do fenótipo maligno das células. A linha celular imWilms10T serve como uma ferramenta importante para investigar o impacto da perda completa de WT1 na sinalização celular, crescimento tumoral e potenciais alvos terapêuticos no tumor de Wilms, particularmente para subtipos tumorais mais agressivos.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia