Células MOLT-4

A MOLT-4 é uma linhagem celular de linfoblastos T derivada do sangue periférico de um paciente do sexo masculino de 19 anos com leucemia linfoblástica aguda (LLA) em recidiva, em 1971. Trata-se de uma linhagem celular irmã da MOLT-3, embora a MOLT-4 apresente um rearranjo incomum do gene da cadeia gama do receptor de antígeno das células T (T-gama). As células MOLT-4 têm um tempo de duplicação de cerca de 30 horas, crescem em suspensão e são tumorigênicas em camundongos nude não tratados, em camundongos tratados com soro antilinfocitário e em camundongos submetidos a irradiação com raios X.

As células MOLT-4 apresentam um número cromossômico hipertetraplóide, com o número modal de cromossomos de 95 ocorrendo em 24% das células, mas apresentam anomalias estruturais cromossômicas estáveis e recorrentes, além de comprimento de telômeros mais longo. A MOLT-4 expressa uma variedade de marcadores de células T, incluindo CD1, CD2, CD3A, CD3B, CD3C, CD4, CD5, CD6 e CD7. Ela também expressa altos níveis de desoxinucleotidiltransferase terminal (TdT).

A linhagem celular MOLT-4 não produz imunoglobulina nem o vírus de Epstein-Barr. O paciente do qual as células foram derivadas havia recebido quimioterapia com múltiplos fármacos anteriormente. Há uma mutação G -> A no códon 248 do gene p53, e o p53 não é expresso. A linhagem foi inicialmente contaminada com micoplasma, mas já foi curada com antibióticos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.