RAW 264.7-GFP

As células RAW 264.7-GFP são um derivado geneticamente modificado da linhagem celular murina RAW 264.7, semelhante a macrófagos, que se origina de um tumor de camundongo adulto da linhagem de monócitos/macrófagos. Essas células foram modificadas para expressar a proteína fluorescente verde (GFP), permitindo a visualização em tempo real de processos celulares, como morfologia, migração e atividade fagocítica, sob microscopia de fluorescência. A linhagem parental RAW 264.7 é amplamente utilizada como modelo para respostas imunes inatas, pois mantém muitas características funcionais dos macrófagos ativados, incluindo a capacidade de produzir citocinas, óxido nítrico e espécies reativas de oxigênio após estimulação.

A incorporação da GFP permite o monitoramento dinâmico e não invasivo do comportamento dos macrófagos in vitro, tornando as células RAW 264.7-GFP particularmente valiosas para estudos de imagem de células vivas e aplicações de triagem de alto conteúdo. Essas células respondem de forma robusta a estímulos pró-inflamatórios, como o lipopolissacarídeo (LPS) e o interferon-gama, levando à ativação de vias de sinalização, incluindo NF-κB e MAPK. Isso as torna um modelo útil para investigar a sinalização inflamatória, as interações hospedeiro-patógeno e os efeitos de agentes farmacológicos na ativação de macrófagos. No entanto, assim como na linhagem parental, os pesquisadores devem levar em consideração que os modelos derivados das células RAW 264.7 podem apresentar vias regulatórias alteradas em comparação com os macrófagos primários.

Modificação genética: Modificada de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, a fim de expressar o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantida como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.