RAW 264.7-GFP

Le cellule RAW 264.7-GFP sono un derivato geneticamente modificato della linea cellulare murina RAW 264.7, simile ai macrofagi, che ha origine da un tumore di topo adulto del lignaggio dei monociti/macrofagi. Queste cellule sono state ingegnerizzate per esprimere la proteina fluorescente verde (GFP), consentendo la visualizzazione in tempo reale di processi cellulari quali la morfologia, la migrazione e l’attività fagocitaria al microscopio a fluorescenza. La linea parentale RAW 264.7 è ampiamente utilizzata come modello per le risposte immunitarie innate, poiché conserva molte caratteristiche funzionali dei macrofagi attivati, tra cui la capacità di produrre citochine, ossido nitrico e specie reattive dell’ossigeno in seguito a stimolazione.

L’incorporazione della GFP consente un monitoraggio dinamico e non invasivo del comportamento dei macrofagi in vitro, rendendo le cellule RAW 264.7-GFP particolarmente preziose per studi di imaging su cellule vive e applicazioni di screening ad alto contenuto. Queste cellule rispondono in modo marcato a stimoli pro-infiammatori quali il lipopolisaccaride (LPS) e l’interferone-gamma, il che porta all’attivazione di vie di segnalazione tra cui NF-κB e MAPK. Ciò le rende un modello utile per lo studio della segnalazione infiammatoria, delle interazioni ospite-patogeno e degli effetti degli agenti farmacologici sull’attivazione dei macrofagi. Tuttavia, come per la linea parentale, i ricercatori dovrebbero tenere presente che i modelli derivati dalle cellule RAW 264.7 potrebbero presentare vie di regolazione alterate rispetto ai macrofagi primari.

Modifica genetica: modificati in modo stabile mediante trasduzione lentivirale a replicazione incompetente per esprimere il reporter della proteina fluorescente verde ZsGreen1; mantenuti come popolazione policlonale sotto selezione con puromicina (1–5 µg/mL). Contenimento S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia