SKW-3

A linhagem celular SKW-3, que inicialmente se acreditava ter sido derivada do sangue periférico de um homem de 61 anos diagnosticado com leucemia linfocítica crônica (LLC), representa um ponto de grande interesse na pesquisa sobre o câncer, particularmente no estudo das leucemias de células B. Com o tempo, reavaliações críticas utilizando o perfil de repetições em tandem curtas (STR) revelaram uma questão importante: as células SKW-3 não são uma linhagem pura do paciente com LLC, mas sim estão contaminadas, sendo agora identificadas como derivadas da linhagem celular KE-37. Essa revelação tem implicações profundas para pesquisas anteriores e estudos futuros, enfatizando a necessidade de uma autenticação rigorosa das linhagens celulares para garantir a precisão experimental.

A KE-37, a verdadeira origem das células SKW-3, é uma linhagem de células B estabelecida a partir de um paciente com leucemia linfoblástica aguda (LLA). Essa mudança na origem, de LLC para LLA, devido à contaminação, altera drasticamente o contexto biológico e a utilidade da linhagem SKW-3. Para os pesquisadores, isso significa que quaisquer descobertas ou dados anteriormente atribuídos a mecanismos específicos da CLL ao usar a SKW-3 devem ser avaliados criticamente e, potencialmente, revisados. A reclassificação como um derivado da KE-37 exige uma mudança na aplicação das células SKW-3 para estudos mais relevantes para a LLA e seus mecanismos subjacentes, em vez da CLL.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.