Премини към съдържанието
Клетки HBL-100
Тъкан
Гърди
Заболяване
Карцином
Синоними
HBL 100, HBL100

Документи

Клетки HBL-100

Cell line · Номер на продукта 300178

HBL-100 е клетъчна линия от епителни клетки на човешката гърда, получена първоначално от кърмата на кърмеща майка. Кърмата е била събрана три дни след раждането...

€430.00без ДДС и доставка
Наличността е ниска
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

HBL-100 е човешка епителна клетъчна линия на гърдата, която първоначално е получена от кърмата на кърмеща майка. Млякото е събрано три дни след раждането и въпреки че няма данни за увреждане на гърдата при донора и няма фамилна анамнеза за рак на гърдата, клетките показват анормален кариотип до пасаж 7. Тази клетъчна линия се отличава със способността си да синтезира малко количество лактоза и да реагира на стимулация с пролактин или естроген, като увеличава производството на казеин. Микроскопските анализи, като например електронните микрографии, потвърждават наличието на микровили, тонофибрили и десмозоми в тези клетки, което подчертава типичните им епителни характеристики.

Въпреки това, клетъчната линия HBL-100 се сблъска със значителни усложнения по отношение на нейното идентифициране и характеризиране. Установено е, че тя съдържа Y-хромозома, което предполага погрешна идентификация, тъй като първоначално се е смятало, че клетъчната линия е от женски произход. Допълнителни усложнения възникват от наличието на геномни последователности SV40 в клетъчната линия, което противоречи на по-ранните мнения, че тя е спонтанно имортализирана. Тези открития доведоха до дебати относно произхода и генетичния състав на HBL-100, което я прави проблематична клетъчна линия за изследвания без задълбочено потвърждение на нейните характеристики и произход.

Тъкан
Гърди
Заболяване
Карцином
Синоними
  • HBL 100
  • HBL100

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Подобни на епител
Туморогенен
Да, при голи мишки. При нива на пасаж под 35 линията не е туморогенна при голи мишки, но образува колонии в мек агар. Съобщава се, че туморогенността се увеличава над пасаж 35.
Плоидност
Анеуплоидни
Статус на MSI
Стабилен (MSS)
Кариотип
Броят на хромозомите в стъблото е близък до триплоидния, като модалният брой е 67 хромозоми, а компонентът 2S се среща в 0,6 %. Повечето хромозомни комплекси се състоят от около 39 нормални и 28 маркерни хромозоми. Маркери като 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt и много други са характерни за повечето метафази. Нормалните хромозоми 11, 14, 15 и 16 отсъстват. 2, 12, 17 и 19 са монозомични, а х е дизомична. ДНК профилирането за амелогенин, специфичен за половите хромозоми PCR тест, който може да разграничи продуктите, специфични за х хромозомите, от продуктите, специфични за Y хромозомите, разкрива наличието на Y хромозоми в тази клетъчна линия с предполагаем женски произход. Потвърждаването на общите констатации е извършено чрез оцветяване с QM, C-бандиране и FISH с цяла хромозомна боядисана сонда към човешката Y хромозома.

04Идентификатори

Източник
HBL-100 (каталожен номер 300178 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_4362

05Проява и предразположеност

Експресия на антигена
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Изоензими
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, фенотип Честота на продукта: 0.0008
Вируси
Клетките съдържат тамдемно интегриран геном на SV40, за който се съобщава, че може да съдържа ретровирус от тип D, който е подобен или идентичен с вируса на маймуната Мейсън-Пфайзер (MPMV).
Обратна транскриптаза
Положителен

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
McCoys 5a, w: 3,0 g/L глюкоза, w: стабилен глутамин, w: 2,0 mM натриев пируват, w: 2,2 g/L NaHCO3 (номер на статията в Cytion 820200a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Плътност на засяването
1 x 104 клетки/cm2
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Възстановяване след размразяване
След размразяване, поставете клетките в плаки с плътност 5 x 104 клетки/cm2 и оставете клетките да се възстановят от процеса на замразяване и да се прикрепят за най-малко 24 часа.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
27 години
Етническа принадлежност
Кавказки