Mine otse sisu juurde
HBL-100 rakud
Kude
Rind
Haigus
Kartsinoom
Sünonüümid
HBL 100, HBL100

Dokumendid

HBL-100 rakud

Cell line · Toote number 300178

HBL-100 on inimese rindade epiteelirakuliin, mis on algselt saadud imetava ema rinnapiimast. Piim koguti kolm päeva pärast sünnitust...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Varud on väikesed
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HBL-100 on inimese rinnaepiteeli rakuliin, mis on algselt saadud imetava ema rinnapiimast. Piim koguti kolm päeva pärast sünnitust ja hoolimata sellest, et doonoril ei olnud mingeid tõendeid rinnanäärme kahjustuste kohta ja et perekonnas ei esinenud rinnavähki, ilmnesid rakud 7. läbipääsul ebanormaalne karyotüüp. See rakuliin on tähelepanuväärne oma võime poolest sünteesida väike kogus laktoosi ja reageerida prolaktiini või östrogeeni stimulatsioonile kaseiini tootmise suurendamisega. Mikroskoopilised analüüsid, näiteks elektronmikrofotod, on kinnitanud mikrovillide, toonofibrillide ja desmosoomide olemasolu nendes rakkudes, mis rõhutab nende tüüpilisi epiteeliomadusi.

HBL-100 rakuliinil on siiski esinenud olulisi komplikatsioone seoses selle identifitseerimise ja iseloomustamisega. Leiti, et see sisaldab Y-kromosoomi, mis viitab valesti identifitseerimisele, kuna algselt arvati, et rakuliin on naissoost. Täiendav keerukus tuleneb SV40 genoomsete sekventside esinemisest rakuliinis, mis on vastuolus varasemate arvamustega, et see on spontaanselt immortaliseerunud. Need leiud on viinud aruteludeni HBL-100 päritolu ja geneetilise koostise üle, mis muudab selle rakuliini teadustööks problemaatiliseks, kui selle omadusi ja päritolu ei ole põhjalikult valideeritud.

Kude
Rind
Haigus
Kartsinoom
Sünonüümid
  • HBL 100
  • HBL100

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, alasti hiirtel. Alla 35-ndal läbipääsutasandil ei ole liin alasti hiirtel tumorigeenne, kuid moodustab kolooniaid pehmel agaril. On teatatud, et üle 35. passiivsuse suureneb tumorigeensus.
Ploidsus
Aneuploidne
MSI staatus
Stabiilne (MSS)
Karyotüüp
Tüveline kromosoomide arv on peaaegu triploidne, modaalne kromosoomide arv on 67 ja 2S-komponent esineb 0,6% ulatuses. Enamik kromosoomikomplekte koosneb umbes 39 normaalsest ja 28 markerkromosoomist. Markerid nagu 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt ja paljud teised on enamikul metafaasidest ühised. Normaalsed kromosoomid 11, 14, 15 ja 16 puuduvad. 2, 12, 17 ja 19 on monosoomsed ja x on disoomne. DNA-profiili määramine amelogeniini jaoks, mis on sugukromosoomispetsiifiline PCR-analüüs, mis suudab eristada x-kromosoomi spetsiifilisi tooteid Y-kromosoomi spetsiifilistest toodetest, näitas Y-kromosoomide olemasolu selles oletatavalt naispäritolu rakuliinis. Üldiste leidude kinnitamiseks kasutati QM-värvimist, C-banding'i ja FISH-meetodit, mille puhul kasutati inimese Y-kromosoomi kogu kromosoomi värvi sondi.

04Tunnused

Viide
HBL-100 (Cytioni katalooginumber 300178)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Antigeeni ekspressioon
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Isoensüümid
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, fenotüübi sageduse toode: 0.0008
Viirused
Rakud sisaldavad tamdemly integreeritud SV40 genoomi, on teatatud, et nad võivad sisaldada D-tüüpi retroviirust, mis on sarnane või identne Mason-Pfizer'i ahviviirusega (MPMV).
Pöördtranskriptaas
Positiivne

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820200a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
27 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia