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HBL 100, HBL100

HBL-100 셀

Cell line · 제품 번호 300178

HBL-100은 수유 중인 산모의 모유에서 유래한 인간 유방 상피 세포주입니다. 이 모유는 출산 후 3일째에 채취되었으며...

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01일반 정보

설명

HBL-100은 원래 수유모의 모유에서 유래한 인간 유방 상피 세포주입니다. 모유는 분만 후 3일 후에 채취되었으며, 기증자에게 유방 병변의 증거가 없고 유방암 가족력이 없음에도 불구하고 세포는 7번 통과에서 비정상적인 핵형을 보였습니다. 이 세포주는 소량의 유당을 합성하고 카제인 생성을 증가시켜 프로락틴 또는 에스트로겐 자극에 반응하는 능력으로 주목할 만합니다. 전자 현미경 사진과 같은 현미경 분석을 통해 이 세포에 미세 융모, 토노섬유, 데스모솜이 존재한다는 것이 확인되어 전형적인 상피 세포의 특성을 강조했습니다.

그러나 HBL-100 세포주는 그 식별 및 특성 분석과 관련하여 상당한 어려움을 겪었습니다. 이 세포주에는 Y 염색체가 포함되어 있는 것으로 밝혀졌는데, 이는 처음에 이 세포주가 여성에서 유래한 것으로 여겨졌기 때문에 오인이 있었음을 시사합니다. 세포주 내에 SV40 게놈 서열이 존재하여 자연적으로 불멸화되었다는 이전의 믿음과 모순되어 더 복잡한 문제가 발생했습니다. 이러한 발견으로 인해 HBL-100의 기원과 유전적 구성에 관한 논쟁이 벌어졌고, 그 특성과 기원에 대한 철저한 검증 없이는 연구에 사용하기에 문제가 있는 세포주로 여겨졌습니다.

티슈
유방
질병
암종
동의어
  • HBL 100
  • HBL100

02분류

생물체
인간
성
여성
성장 특성
준수자
생물안전 등급
1

03특징

형태학
상피 유사
종양 유발성
예, 누드 마우스에서. 통과 수준 35 미만에서는 누드 마우스에서 종양 유발성이 없지만 연성 한천에서 콜로니를 형성합니다. 종양원성은 통과 35 이상에서 증가하는 것으로 보고되었습니다.
배수성 상태
이수성
MSI 현황
안정(MSS)
염색체형
줄기 염색체 수는 67개의 염색체 모달 수로 삼배체에 가깝고, 2S 성분은 0.6%에서 발생합니다. 대부분의 염색체 보체는 약 39개의 정상 염색체와 28개의 마커 염색체로 구성됩니다. 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt 등과 같은 마커는 대부분의 메타상에 공통으로 나타납니다. 정상 염색체 11, 14, 15, 16번은 없습니다. 2, 12, 17, 19는 단염색체이며, X는 이염색체입니다. X 염색체 특이적 산물과 Y 염색체 특이적 산물을 구별할 수 있는 성 염색체 특이적 PCR 분석법인 아멜로게닌에 대한 DNA 프로파일링을 통해 이 추정 여성 유래 세포주에서 Y 염색체의 존재가 밝혀졌습니다. 일반적인 결과의 확인은 인간 Y 염색체에 대한 전체 염색체 페인트 프로브를 사용하여 QM 염색, C-밴딩 및 FISH를 통해 이루어졌습니다.

04식별자

인용
HBL-100(사이티온 카탈로그 번호 300178)
NCBI 세금 식별번호
9606
셀로사우루스
CVCL_4362

05발현 및 감수성

항원 발현
HLA A1, A10, A11, B7, B8
이소효소
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, 표현형 주파수 제품: 0.0008
바이러스
이 세포에는 메이슨-화이자 원숭이 바이러스(MPMV)와 유사하거나 동일한 D형 레트로바이러스가 포함되어 있는 것으로 보고된 탐덤 통합 SV40 게놈이 포함되어 있습니다.
역전사효소
긍정적

06취급 및 배양

배지
맥코이 5a, w: 3.0g/L 포도당, w: 안정 글루타민, w: 2.0mM 피루브산 나트륨, w: 2.2g/L NaHCO3(사이티온 제품 번호 820200a)
배양 조건

37°C, 5%CO2, 습한 대기.

건강보조식품
10% FBS로 배지를 보충합니다
분리 시약
아큐타제
재배양
부착된 세포에서 오래된 배지를 제거하고 칼슘과 마그네슘이 없는 PBS로 세척합니다. T25 플라스크의 경우 3~5ml, T75 플라스크의 경우 5~10ml의 PBS를 사용합니다. 그런 다음 T25 플라스크의 경우 1~2㎖, T75 플라스크의 경우 2.5㎖를 사용하여 세포를 Accutase로 완전히 덮습니다. 세포를 분리하기 위해 실온에서 8~10분간 배양합니다. 배양 후 세포를 배지 10ml와 부드럽게 혼합하여 재부유시킨 다음 300xg에서 3분간 원심분리합니다. 상층액을 버리고 세포를 신선한 배지에 다시 부유시킨 후 이미 신선한 배지가 들어 있는 새 플라스크에 옮깁니다.
파종 밀도
1 x 10⁴ 세포/cm²
유체 교체
주 2~3회
해동 후 회복
해동 후 세포를 5 x 10⁴ 세포/cm² 농도로 배지에 접종하고, 동결 과정으로부터 회복 및 부착이 완료될 때까지 최소 24시간 동안 배양합니다.
해동 및 배양
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07품질 관리 및 냉동 보존

불임

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.

배양액 동결
냉동 보존 배지로는 해동 후 충분한 생존력을 위해 완전 성장 배지(FBS 포함) + 10% DMSO를 사용하거나, 최적화된 삼투 보호제 및 대사 안정제가 포함된 CM-1(Cytion 카탈로그 번호 800100)을 사용하여 회복력을 높이고 냉동으로 인한 스트레스를 줄입니다.
보관 조건

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

배송 조건

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

08기부자

기증자 연령
27년
민족
백인