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HBL-100セル
ティッシュ
乳房
病気
癌腫
同義語
HBL 100, HBL100

HBL-100セル

Cell line · 製品番号 300178

HBL-100は、授乳中の母親の母乳から由来したヒト乳腺上皮細胞株である。この母乳は、出産後3日目に採取されたもので…

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01概要

説明

HBL-100は、もともと授乳中の母親の母乳に由来するヒト乳房上皮細胞株である。この母乳は分娩後3日目に採取されたもので、提供者に乳房病変の形跡はなく、乳癌の家族歴もないにもかかわらず、継代7日目には異常核型を示した。この細胞株は、少量の乳糖を合成し、カゼインの産生を増加させることによってプロラクチンまたはエストロゲンの刺激に応答する能力で注目される。電子顕微鏡写真などの顕微鏡分析により、これらの細胞には微絨毛、トノフィブリル、デスモソームが存在することが確認され、典型的な上皮性の特徴が強調されている。

しかしながら、HBL-100細胞株は、その同定と特徴付けに関して、重大な複雑さに遭遇した。HBL-100細胞株はY染色体を含んでいることが判明し、当初は女性由来と考えられていたため、誤認が示唆された。さらに複雑なのは、細胞株内にSV40ゲノム配列が存在することで、この細胞株が自然発生的に不死化されたという以前の信念と矛盾する。これらの発見は、HBL-100の起源と遺伝子構成に関する論争を引き起こし、その特徴と起源を徹底的に検証しない限り、研究用細胞株としては問題がある。

ティッシュ
乳房
病気
癌腫
同義語
  • HBL 100
  • HBL100

02分類

生物
人間
セックス
女性
成長特性
アドヘレント
バイオセーフティレベル
1

03特徴

形態学
上皮様
腫瘍形成性
はい、ヌードマウスではそうです。35以下の継代レベルではヌードマウスでは腫瘍性はないが、軟寒天培地ではコロニーを形成する。腫瘍原性は継代35以上では増加すると報告されている。
倍数性
異数体
MSIの状態
安定(MSS)
核型
幹細胞の染色体数は67本で、3倍体に近い。多くの染色体は約39本の正常染色体と28本のマーカー染色体から構成される。2q、11q+、11q、t(2q.12)、t(2q.5q?)、t(6p?.16)、16ptなどのマーカーはほとんどのメタフェースに共通です。正常の11番、14番、15番、16番は存在しません。2,12,17,19番はモノソーム、xはダイソーム。x染色体特異的産物とY染色体特異的産物を区別できる性染色体特異的PCRアッセイであるアメロゲニンのDNAプロファイリングにより、この推定女性由来の細胞株にはY染色体が存在することが明らかになった。一般的な所見の確認は、QM染色、C-バンディング、ヒトY染色体への全染色体ペイントプローブを用いたFISHによって達成された。

04識別子

引用
HBL-100 (Cytion カタログ番号 300178)
NCBI 納税者番号
9606
セロサウルス
CVCL_4362

05発現と感受性

抗原発現
A1, A10, A11, B7, B8
アイソザイム
G6PD、B、PGM1、1、PGM3、2、ES-D、1、Me-2、0、GLO-1、2、AK-1、1-2、表現型頻度積: 0.0008
ウイルス
この細胞はSV40ゲノムをタムデムに組み込んだもので、メイソン・ファイザー・モンキーウイルス(MPMV)と類似または同一のD型レトロウイルスを含んでいる可能性が報告されている。
逆転写酵素
ポジティブ

06取り扱いと飼育

培地
McCoys 5a、w:3.0g/L グルコース、w:安定グルタミン、w:2.0mM ピルビン酸ナトリウム、w:2.2g/L NaHCO3 (Cytion article number 820200a)
培養雰囲気

37℃、5%CO2、加湿雰囲気。

サプリメント
培地に10% FBSを加える
解離試薬
アキュターゼ
継代培養
接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウ ムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
播種密度
1 × 10⁴ 細胞/cm²
流体の更新
週2~3回
解凍後の回復
解凍後、細胞を5×10⁴細胞/cm²で播種し、凍結処理からの回復と接着を少なくとも24時間以上行う。
解凍と培養
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07品質管理と凍結保存

無菌性

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

凍結培地
凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用している。
保管条件

長期保存の場合、バイアルを-150~-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

配送条件

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

08寄付者

ドナーの年齢
27年
民族
白人