Gå direkt till innehållet
HBL-100-celler
Vävnad
Bröst
Sjukdom
Carcinom
Synonymer
HBL 100, HBL100

HBL-100-celler

Cell line · Produktnummer 300178

HBL-100 är en epitelcellinje från mänskligt bröstvävnad som ursprungligen härstammar från bröstmjölk från en ammande mamma. Mjölken samlades in tre dagar efter förlossningen...

€430.00exkl. moms och frakt
Lågt lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

HBL-100 är en human bröstepitelcellinje som ursprungligen härrör från bröstmjölk från en ammande mamma. Mjölken samlades in tre dagar efter förlossningen och trots att det inte fanns några tecken på bröstlesioner hos donatorn och ingen bröstcancer i släkten uppvisade cellerna en onormal karyotyp vid passage 7. Denna cellinje är anmärkningsvärd för sin förmåga att syntetisera en liten mängd laktos och att svara på stimulering med prolaktin eller östrogen genom att öka produktionen av kasein. Mikroskopiska analyser, t.ex. elektronmikrografier, har bekräftat förekomsten av mikrovilli, tonofibriller och desmosomer i dessa celler, vilket understryker deras typiska epiteliala egenskaper.

Cellinjen HBL-100 har dock stött på betydande komplikationer när det gäller identifiering och karakterisering. Det visade sig att den innehöll en Y-kromosom, vilket tyder på en felidentifiering eftersom cellinjen ursprungligen ansågs vara av kvinnligt ursprung. Ytterligare komplexitet uppstår genom förekomsten av SV40-genomsekvenser i cellinjen, vilket motsäger tidigare uppfattningar om att den var spontant odödliggjord. Dessa fynd har lett till debatter om ursprunget och den genetiska sammansättningen hos HBL-100, vilket gör den till en problematisk cellinje för forskning utan grundlig validering av dess egenskaper och ursprung.

Vävnad
Bröst
Sjukdom
Carcinom
Synonymer
  • HBL 100
  • HBL100

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitelliknande
Tumörframkallande
Ja, i nakna möss. Vid passagenivåer under 35 är linjen inte tumörframkallande i nakna möss, men bildar kolonier i mjuk agar. Tumörframkallande förmåga har rapporterats öka över passage 35.
Ploidistatus
Aneuploid
MSI-status
Stabilt (MSS)
Karyotyp
Stamlinjens kromosomantal är nära triploid med ett modalt antal på 67 kromosomer och 2S-komponenten förekommer med 0,6%. De flesta kromosomkomplement består av cirka 39 normala kromosomer och 28 markörkromosomer. Markörer som 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt och många andra är vanliga i de flesta metafaser. De normala kromosomerna 11, 14, 15 och 16 saknas. 2, 12, 17 och 19 är monosomiska, och x är disomisk. DNA-profilering för amelogenin, en könskromosomspecifik PCR-analys som kan skilja x-kromosomspecifika produkter från Y-kromosomspecifika produkter, visade att det fanns Y-kromosomer i denna cellinje av förmodat kvinnligt ursprung. De allmänna fynden bekräftades genom QM-färgning, C-bandning och FISH, med en färgprobe för hela kromosomen till den humana Y-kromosomen.

04Identifierare

Källa
HBL-100 (Cytion katalognummer 300178)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Uttryck och mottaglighet

Antigenuttryck
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Isoenzymer
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotyp Frekvens Produkt: 0.0008
Virus
Cellerna innehåller ett tamdemlyintegrerat SV40-genom och det har rapporterats att de kan innehålla ett retrovirus av typ D som liknar eller är identiskt med Mason-Pfizer monkey virus (MPMV).
Omvänt transkriptas
Positiv

06Hantering och odling

Odlingsmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukos, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
1 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Återhämtning efter upptining
Efter upptining, plattlägg cellerna med 5 x 104 celler/cm2 och låt cellerna återhämta sig från frysprocessen och fästa i minst 24 timmar.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Donatorns ålder
27 år
Etnicitet
Kaukasisk