Siirry sisältöön
HBL-100-solut
Kudos
Rinta
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
HBL 100, HBL100

Asiakirjat

HBL-100-solut

Cell line · Tuotenumero 300178

HBL-100 on ihmisen rintaepiteelisolulinja, joka on alun perin peräisin imettävän äidin rintamaidosta. Maito kerättiin kolme päivää synnytyksen jälkeen...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa vähän
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HBL-100 on ihmisen rintaepiteelisolulinja, joka on alun perin saatu imettävän äidin rintamaidosta. Maito kerättiin kolme päivää synnytyksen jälkeen, ja vaikka luovuttajalla ei ollut merkkejä rintamuutoksesta eikä suvussa esiintynyt rintasyöpää, solut osoittivat epänormaalia karyotyyppiä läpikäynnin 7 aikana. Tämä solulinja on tunnettu siitä, että se pystyy syntetisoimaan pienen määrän laktoosia ja reagoimaan prolaktiinin tai estrogeenin stimulaatioon lisäämällä kaseiinin tuotantoa. Mikroskooppiset analyysit, kuten elektronimikroskooppikuvaukset, ovat vahvistaneet mikrovillien, tonofibrillien ja desmosomien esiintymisen näissä soluissa, mikä korostaa niiden tyypillisiä epiteeliominaisuuksia.

HBL-100-solulinjalla on kuitenkin ollut huomattavia vaikeuksia sen tunnistamisessa ja karakterisoinnissa. Sen todettiin sisältävän Y-kromosomin, mikä viittaa virheelliseen tunnistukseen, sillä solulinjan luultiin alun perin olevan naisperäinen. Lisäkompleksisuutta aiheuttaa SV40-genomisekvenssien esiintyminen solulinjassa, mikä on ristiriidassa aikaisempien käsitysten kanssa, joiden mukaan solulinja oli spontaanisti kuolematon. Nämä havainnot ovat johtaneet keskusteluihin HBL-100:n alkuperästä ja geneettisestä koostumuksesta, mikä tekee siitä ongelmallisen solulinjan tutkimukseen ilman sen ominaisuuksien ja alkuperän perusteellista validointia.

Kudos
Rinta
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
  • HBL 100
  • HBL100

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä. Alle 35:n läpivientitasoilla linja ei ole nude-hiirissä tumorigeeninen, mutta se muodostaa pesäkkeitä pehmeässä agarissa. Tumorigeenisyyden on raportoitu lisääntyvän yli 35. läpiviennin jälkeen.
Ploidisuus
Aneuploidinen
MSI-tila
Vakaa (MSS)
Karyotyyppi
Kromosomiluku on lähes triploidi, modaaliluku on 67 kromosomia, ja 2S-komponenttia esiintyy 0,6 prosenttia. Useimmat kromosomikomplementit koostuvat noin 39 normaalista ja 28 merkkikromosomista. Markkereita, kuten 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt ja monet muut ovat yleisiä useimmissa metafaaseissa. Normaalit kromosomit 11, 14, 15 ja 16 puuttuvat. kromosomit 2, 12, 17 ja 19 ovat monosomisia, ja x on disominen. DNA-profilointi amelogeniinille, joka on sukupuolikromosomispesifinen PCR-määritys, jolla voidaan erottaa x-kromosomispesifiset tuotteet Y-kromosomispesifisistä tuotteista, paljasti Y-kromosomien esiintymisen tässä oletettavasti naisperäisessä solulinjassa. Yleiset löydökset vahvistettiin QM-värjäyksellä, C-banding-menetelmällä ja FISH-menetelmällä, jossa käytettiin ihmisen Y-kromosomiin kohdistuvaa koko kromosomin maalauskoetinta.

04Tunnisteet

Lähdeviite
HBL-100 (Cytionin luettelonumero 300178)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Ilmentyminen ja alttius

Antigeenin ilmentyminen
HLA A1, A10, A11, B7 JA B8
Isoentsyymit
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotyypin frekvenssituote: 0.0008
Virukset
Solut sisältävät tamdemly-integroituneen SV40-genomin, ja on raportoitu, että ne saattavat sisältää D-tyypin retrovirusta, joka on samanlainen tai identtinen Mason-Pfizer-apinaviruksen (MPMV) kanssa.
Käänteiskopioijaentsyymi
Positiivinen

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukoosia, w: vakaa glutamiini, w: 2,0 mM natriumpyruvaattia, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820200a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
27 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen