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Cellule HBL-100
Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
HBL 100, HBL100

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Cellule HBL-100

Cell line · Codice prodotto 300178

HBL-100 è una linea cellulare epiteliale mammaria umana originariamente derivata dal latte materno di una madre che allattava. Il latte è stato raccolto tre giorni dopo il parto...

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01Informazioni generali

Descrizione

HBL-100 è una linea cellulare epiteliale mammaria umana originariamente derivata dal latte materno di una madre che allattava. Il latte è stato raccolto tre giorni dopo il parto e, nonostante la donatrice non presentasse alcuna lesione mammaria e non avesse una storia familiare di cancro al seno, al passaggio 7 le cellule presentavano un cariotipo anomalo. Questa linea cellulare si distingue per la capacità di sintetizzare una piccola quantità di lattosio e di rispondere alla stimolazione della prolattina o degli estrogeni aumentando la produzione di caseina. Le analisi microscopiche, come le micrografie elettroniche, hanno confermato la presenza di microvilli, tonofibrille e desmosomi in queste cellule, evidenziandone le tipiche caratteristiche epiteliali.

Tuttavia, la linea cellulare HBL-100 ha incontrato notevoli complicazioni per quanto riguarda la sua identificazione e caratterizzazione. Si è scoperto che contiene un cromosoma Y, il che suggerisce un'errata identificazione, dato che inizialmente si pensava che la linea cellulare fosse di origine femminile. Un'ulteriore complessità deriva dalla presenza di sequenze genomiche SV40 all'interno della linea cellulare, contraddicendo le precedenti convinzioni che fosse immortalizzata spontaneamente. Questi risultati hanno portato a dibattiti sull'origine e sulla composizione genetica di HBL-100, rendendola una linea cellulare problematica per la ricerca senza un'approfondita convalida delle sue caratteristiche e della sua origine.

Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • HBL 100
  • HBL100

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi. A livelli di passaggio inferiori a 35, la linea non è tumorigenica in topi nudi, ma forma colonie in soft agar. È stato segnalato un aumento della tumorigenicità al di sopra del 35° passaggio.
Stato di ploidia
Aneuploide
Stato MSI
Stabile (MSS)
Cariotipo
Il numero di cromosomi della linea staminale è quasi triploide, con un numero modale di 67 cromosomi e una componente 2S dello 0,6%. La maggior parte dei complementi cromosomici è costituita da circa 39 cromosomi normali e 28 cromosomi marcatori. Marcatori come 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt e molti altri sono comuni alla maggior parte delle metafasi. I cromosomi normali 11, 14, 15 e 16 sono assenti. 2, 12, 17 e 19 sono monosomici e l'x è disomico. Il profilo del DNA per l'amelogenina, un test PCR specifico per i cromosomi sessuali in grado di distinguere i prodotti specifici del cromosoma x da quelli del cromosoma Y, ha rivelato la presenza di cromosomi Y in questa linea cellulare di origine putativamente femminile. La conferma dei risultati generali è stata ottenuta mediante colorazione QM, C-banding e FISH, con una sonda a vernice per cromosomi interi sul cromosoma Y umano.

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HBL-100 (numero di catalogo Cytion 300178)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Isoenzimi
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0008
Virus
Le cellule contengono un genoma SV40 integrato tamdemicamente ed è stato segnalato che possono contenere un retrovirus di tipo D simile o identico al Mason-Pfizer monkey virus (MPMV).
Trascriptasi inversa
Positivo

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
27 anni
Etnia
Caucasico