Przejdź do treści
Komórki HBL-100
Chusteczka
Pierś
Choroba
Rak
Synonimy
HBL 100, HBL100

Dokumenty

Komórki HBL-100

Cell line · Numer produktu 300178

HBL-100 to ludzka linia komórek nabłonkowych piersi, pierwotnie wyizolowana z mleka matki karmiącej. Mleko pobrano trzy dni po porodzie...

€430.00bez podatku i kosztów wysyłki
Niski stan magazynowy
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

HBL-100 to ludzka linia komórek nabłonkowych piersi, pierwotnie uzyskana z mleka matki karmiącej. Mleko zostało pobrane trzy dni po porodzie i pomimo braku dowodów na uszkodzenie piersi u dawczyni i braku rodzinnej historii raka piersi, komórki wykazywały nieprawidłowy kariotyp do 7. przejścia. Ta linia komórkowa wyróżnia się zdolnością do syntezy niewielkiej ilości laktozy i reagowania na stymulację prolaktyną lub estrogenem poprzez zwiększenie produkcji kazeiny. Analizy mikroskopowe, takie jak mikrografie elektronowe, potwierdziły obecność mikrokosmków, tonofibryli i desmosomów w tych komórkach, podkreślając ich typowe cechy nabłonkowe.

Jednakże, linia komórkowa HBL-100 napotkała znaczące komplikacje dotyczące jej identyfikacji i charakterystyki. Stwierdzono, że zawiera chromosom Y, co sugeruje błędną identyfikację, ponieważ początkowo uważano, że linia komórkowa jest pochodzenia żeńskiego. Dalsza złożoność wynika z obecności sekwencji genomowych SV40 w linii komórkowej, co zaprzecza wcześniejszym przekonaniom, że została ona spontanicznie unieśmiertelniona. Odkrycia te doprowadziły do debat dotyczących pochodzenia i składu genetycznego HBL-100, czyniąc ją problematyczną linią komórkową do badań bez dokładnego potwierdzenia jej cech i pochodzenia.

Chusteczka
Pierś
Choroba
Rak
Synonimy
  • HBL 100
  • HBL100

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobny do nabłonka
Nowotworotwórczy
Tak, u nagich myszy. Przy poziomach pasażowania poniżej 35 linia nie jest nowotworowa u nagich myszy, ale tworzy kolonie w miękkim agarze. Stwierdzono, że nowotworowość wzrasta powyżej 35. pasażowania.
Status ploidii
Aneuploid
Stan MSI
Stabilny (MSS)
Karyotyp
Liczba chromosomów linii macierzystej jest bliska triploidalnej z modalną liczbą 67 chromosomów i składnikiem 2S występującym na poziomie 0,6%. Większość chromosomów składa się z około 39 normalnych i 28 markerowych chromosomów. Markery takie jak 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt i wiele innych są wspólne dla większości metafaz. Normalne chromosomy 11, 14, 15 i 16 są nieobecne. 2, 12, 17 i 19 są monosomiczne, a x jest disomiczny. Profilowanie DNA pod kątem amelogeniny, test PCR specyficzny dla chromosomów płciowych, który może odróżnić produkty specyficzne dla chromosomu x od produktów specyficznych dla chromosomu Y, ujawnił obecność chromosomów Y w tej linii komórkowej domniemanego pochodzenia żeńskiego. Potwierdzenie ogólnych ustaleń zostało osiągnięte poprzez barwienie QM, C-banding i FISH, z sondą do malowania całego chromosomu do ludzkiego chromosomu Y.

04Identyfikatory

Źródło
HBL-100 (numer katalogowy Cytion 300178)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Ekspresja i podatność

Ekspresja antygenu
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Izoenzymy
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, produkt częstotliwości fenotypu: 0.0008
Wirusy
Komórki zawierają tamdemalnie zintegrowany genom SV40, donoszono, że mogą zawierać retrowirusa typu D, który jest podobny lub identyczny z wirusem małp Mason-Pfizer (MPMV).
Transkryptaza odwrotna
Pozytywny

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukozy, w: stabilna glutamina, w: 2,0 mM pirogronianu sodu, w: 2,2 g/l NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820200a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Gęstość wysiewu
1 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Po rozmrożeniu umieść komórki na płytce w ilości 5 x 104 komórek/cm2 i pozostaw je na co najmniej 24 godziny, aby mogły się zregenerować po procesie zamrażania i przylgnąć do podłoża.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
27 lat
Pochodzenie etniczne
Kaukaski