Pāriet uz saturu
HBL-100 šūnas
Audums
Krūtis
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
HBL 100, HBL100

Dokumenti

HBL-100 šūnas

Cell line · Preces numurs 300178

HBL-100 ir cilvēka krūts epitēlija šūnu līnija, kas sākotnēji iegūta no zīdītājas mātes krūts piena. Piens tika savākts trīs dienas pēc dzemdībām...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Neliels krājums
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HBL-100 ir cilvēka krūts epitēlija šūnu līnija, kas sākotnēji iegūta no barojošas mātes piena. Piens tika ievākts trīs dienas pēc dzemdībām, un, lai gan donorei nebija nekādu krūts bojājumu un ģimenē nebija krūts vēža gadījumu, šūnām līdz 7. pārejai bija patoloģisks kariotips. Šī šūnu līnija izceļas ar spēju sintezēt nelielu daudzumu laktozes un reaģēt uz prolaktīna vai estrogēnu stimulāciju, palielinot kazeīna ražošanu. Mikroskopiskās analīzes, piemēram, elektronmikrogrāfijas, ir apstiprinājušas mikroviļu, tonofibrilu un desmosomu klātbūtni šūnās, uzsverot tām raksturīgās epitēlija īpašības.

Tomēr HBL-100 šūnu līnija ir saskārusies ar ievērojamiem sarežģījumiem attiecībā uz tās identifikāciju un raksturojumu. Tika konstatēts, ka tā satur Y hromosomu, kas liecina par kļūdainu identifikāciju, jo sākotnēji tika uzskatīts, ka šūnu līnija ir sieviešu izcelsmes. Papildu sarežģījumus rada SV40 genoma sekvenču klātbūtne šūnu līnijā, kas ir pretrunā ar agrākajiem uzskatiem, ka tā ir spontāni imortalizēta. Šie atklājumi ir izraisījuši diskusijas par HBL-100 izcelsmi un ģenētisko sastāvu, padarot to par problemātisku šūnu līniju pētījumiem, ja nav veikta rūpīga tās īpašību un izcelsmes apstiprināšana.

Audums
Krūtis
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
  • HBL 100
  • HBL100

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, kailām pelēm. Ja pasāžas līmenis ir zemāks par 35, līnija nav tumorogēna nude pelēm, bet veido kolonijas mīkstajā agārā. Ir ziņots, ka audzēja aktivitāte palielinās virs 35. pasāžas.
Ploidijas statuss
Aneuploīds
MSI statuss
Stabils (MSS)
Kariotips
Cilmes līnijas hromosomu skaits ir tuvu triploīdam ar 67 hromosomām, un 2S komponents sastopams 0,6 % apmērā. Lielākā daļa hromosomu komplektu sastāv no aptuveni 39 normālām un 28 marķieru hromosomām. Tādi marķieri kā 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt un daudzi citi ir raksturīgi vairumam metafāžu. Nav normālu 11., 14., 15. un 16. hromosomas. 2, 12, 17 un 19 ir monosomiskas, un x ir disomiska. DNS profilēšana amelogenīna noteikšanai, kas ir dzimumhromosomām specifisks PCR tests, ar kuru var atšķirt x hromosomai specifiskus produktus no Y hromosomai specifiskiem produktiem, atklāja Y hromosomu klātbūtni šajā iespējami sieviešu izcelsmes šūnu līnijā. Vispārējos rezultātus apstiprināja ar QM krāsošanu, C-bandingu un FISH, izmantojot cilvēka Y hromosomas krāsu zondi ar visu hromosomu.

04Identifikatori

Atsauce
HBL-100 (Cytion kataloga numurs 300178)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Pazīmes un uzņēmība

Antigēna ekspresija
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Izoenzīmi
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotipu biežuma produkts: 0.0008
Vīrusi
Šūnās ir tamdēļ integrēts SV40 genoms, ir ziņots, ka tajās var būt D tipa retrovīruss, kas ir līdzīgs vai identisks Mason-Pfizer pērtiķu vīrusam (MPMV).
Reversā transkriptāze
Pozitīvs

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820200a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
27 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis