HBL-100 šūnas
Cell line · Preces numurs 300178
HBL-100 ir cilvēka krūts epitēlija šūnu līnija, kas sākotnēji iegūta no zīdītājas mātes krūts piena. Piens tika savākts trīs dienas pēc dzemdībām...
Pielāgošana / Ieteikumi
- HBL-100 šūnasCell line€430.00
Ieteicams (jaunākā partija)
01Vispārīga informācija
- Apraksts
HBL-100 ir cilvēka krūts epitēlija šūnu līnija, kas sākotnēji iegūta no barojošas mātes piena. Piens tika ievākts trīs dienas pēc dzemdībām, un, lai gan donorei nebija nekādu krūts bojājumu un ģimenē nebija krūts vēža gadījumu, šūnām līdz 7. pārejai bija patoloģisks kariotips. Šī šūnu līnija izceļas ar spēju sintezēt nelielu daudzumu laktozes un reaģēt uz prolaktīna vai estrogēnu stimulāciju, palielinot kazeīna ražošanu. Mikroskopiskās analīzes, piemēram, elektronmikrogrāfijas, ir apstiprinājušas mikroviļu, tonofibrilu un desmosomu klātbūtni šūnās, uzsverot tām raksturīgās epitēlija īpašības.
Tomēr HBL-100 šūnu līnija ir saskārusies ar ievērojamiem sarežģījumiem attiecībā uz tās identifikāciju un raksturojumu. Tika konstatēts, ka tā satur Y hromosomu, kas liecina par kļūdainu identifikāciju, jo sākotnēji tika uzskatīts, ka šūnu līnija ir sieviešu izcelsmes. Papildu sarežģījumus rada SV40 genoma sekvenču klātbūtne šūnu līnijā, kas ir pretrunā ar agrākajiem uzskatiem, ka tā ir spontāni imortalizēta. Šie atklājumi ir izraisījuši diskusijas par HBL-100 izcelsmi un ģenētisko sastāvu, padarot to par problemātisku šūnu līniju pētījumiem, ja nav veikta rūpīga tās īpašību un izcelsmes apstiprināšana.
- Audums
- Krūtis
- Slimība
- Karcinoma
- Sinonīmi
- HBL 100
- HBL100
02Klasifikācija
- Organisms
- Cilvēks
- Sekss
- Sieviete
- Augšanas īpašības
- Atbalstītājs
- Bioloģiskās drošības līmenis
- 1
03Raksturlielumi
- Morfoloģija
- Epitēlijveidīgs
- Tumorogēns
- Jā, kailām pelēm. Ja pasāžas līmenis ir zemāks par 35, līnija nav tumorogēna nude pelēm, bet veido kolonijas mīkstajā agārā. Ir ziņots, ka audzēja aktivitāte palielinās virs 35. pasāžas.
- Ploidijas statuss
- Aneuploīds
- MSI statuss
- Stabils (MSS)
- Kariotips
- Cilmes līnijas hromosomu skaits ir tuvu triploīdam ar 67 hromosomām, un 2S komponents sastopams 0,6 % apmērā. Lielākā daļa hromosomu komplektu sastāv no aptuveni 39 normālām un 28 marķieru hromosomām. Tādi marķieri kā 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt un daudzi citi ir raksturīgi vairumam metafāžu. Nav normālu 11., 14., 15. un 16. hromosomas. 2, 12, 17 un 19 ir monosomiskas, un x ir disomiska. DNS profilēšana amelogenīna noteikšanai, kas ir dzimumhromosomām specifisks PCR tests, ar kuru var atšķirt x hromosomai specifiskus produktus no Y hromosomai specifiskiem produktiem, atklāja Y hromosomu klātbūtni šajā iespējami sieviešu izcelsmes šūnu līnijā. Vispārējos rezultātus apstiprināja ar QM krāsošanu, C-bandingu un FISH, izmantojot cilvēka Y hromosomas krāsu zondi ar visu hromosomu.
04Identifikatori
- Atsauce
- HBL-100 (Cytion kataloga numurs 300178)
- NCBI nodokļu identifikācijas numurs
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_4362
05Pazīmes un uzņēmība
- Antigēna ekspresija
- HLA A1, A10, A11, B7, B8
- Izoenzīmi
- G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotipu biežuma produkts: 0.0008
- Vīrusi
- Šūnās ir tamdēļ integrēts SV40 genoms, ir ziņots, ka tajās var būt D tipa retrovīruss, kas ir līdzīgs vai identisks Mason-Pfizer pērtiķu vīrusam (MPMV).
- Reversā transkriptāze
- Pozitīvs
06Apstrāde un audzēšana
- Barotne
- McCoys 5a, w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820200a)
- Inkubācijas vide
37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.
- Papildinājumi
- Papildināt barotni ar 10% FBS
- Disociācijas reaģents
- Accutase
- Pārstādīšana
- Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
- Sēšanas blīvums
- 1 x 104 šūnas/cm2
- Šķidruma atjaunošana
- 2 līdz 3 reizes nedēļā
- Atgūšanās pēc atkusņa
- Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
- Atkausēšana un kultivēšana
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija
- Sterilitāte
Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.
Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.
- Saldēšanas barotne
- Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
- Uzglabāšanas nosacījumi
Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.
- Piegādes nosacījumi
Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.
08Ziedotājs
- Donora vecums
- 27 gadi
- Etniskā piederība
- Kaukāzietis
09Juridiskie jautājumi un drošība
- Drošības pasākumi
- Plānojot uzglabāt kriokviālu šķidrā slāpeklī turpmākai atkausēšanai, obligāti jāievēro stingri drošības pasākumi. Ir nepieciešami piemēroti aizsargcimdi un apģērbs, un, pārvietojot sasaldētos paraugus uz šķidrā slāpekļa tvertni vai no tās, ir jālieto sejas maska vai aizsargbrilles. Tas jādara, lai mazinātu traumu risku, ko var radīt iespējamas kriokrioviālu eksplozijas, kas var izraisīt asu fragmentu izmešanu.
- Garantija
Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām
Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu
- Nepieciešams materiālu nodošanas līgums
- Jā
.jpg)