Gå til innholdet
HBL-100-celler
Vev
Bryst
Sykdom
Karsinom
Synonymer
HBL 100, HBL100

Dokumenter

HBL-100-celler

Cell line · Produktnummer 300178

HBL-100 er en epitelcellelinje fra menneskelig brystvev som opprinnelig stammer fra morsmelken til en ammende mor. Melken ble samlet inn tre dager etter fødselen...

€430.00ekskl. mva. og frakt
Lite på lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
  • CoA
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

HBL-100 er en human brystepitelcellelinje som opprinnelig stammer fra morsmelk fra en ammende mor. Melken ble samlet inn tre dager etter fødselen, og til tross for at det ikke fantes tegn til brystlesjoner hos donoren og ingen brystkreft i familien, viste cellene en unormal karyotype ved passasje 7. Denne cellelinjen er kjent for sin evne til å syntetisere en liten mengde laktose og til å respondere på prolaktin- eller østrogenstimulering ved å øke produksjonen av kasein. Mikroskopiske analyser, som elektronmikrografier, har bekreftet tilstedeværelsen av mikrovilli, tonofibriller og desmosomer i disse cellene, noe som fremhever deres typiske epiteliale egenskaper.

HBL-100-cellelinjen har imidlertid støtt på betydelige komplikasjoner når det gjelder identifisering og karakterisering. Det viste seg at den inneholder et Y-kromosom, noe som tyder på en feilidentifisering, ettersom cellelinjen opprinnelig ble antatt å være av kvinnelig opprinnelse. Ytterligere kompleksitet oppstår som følge av tilstedeværelsen av SV40-genomsekvenser i cellelinjen, noe som strider mot tidligere oppfatninger om at den var spontant udødeliggjort. Disse funnene har ført til diskusjoner om opprinnelsen og den genetiske sammensetningen av HBL-100, noe som gjør den til en problematisk cellelinje for forskning uten grundig validering av dens egenskaper og opprinnelse.

Vev
Bryst
Sykdom
Karsinom
Synonymer
  • HBL 100
  • HBL100

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende
Tumorinduserende
Ja, i nakne mus. Ved passasjenivåer under 35 er linjen ikke tumorigen i nakenmus, men danner kolonier i myk agar. Det er rapportert at tumorigenisiteten øker over passasje 35.
Ploidistatus
Aneuploid
MSI-status
Stabil (MSS)
Karyotype
Stamlinjekromosomantallet er nær triploid med et modalt antall på 67 kromosomer, og 2S-komponenten forekommer i 0,6 % av tilfellene. De fleste kromosomkomplementene består av ca. 39 normale kromosomer og 28 markørkromosomer. Markører som 2q, 11q+, 11q, t(2q.12), t(2q.5q?), t(6p?.16), 16pt og mange andre er felles for de fleste metafaser. De normale kromosomene 11, 14, 15 og 16 er fraværende. 2, 12, 17 og 19 er monosomiske, og x er disomisk. DNA-profilering for amelogenin, en kjønnskromosomspesifikk PCR-analyse som kan skille x-kromosomspesifikke produkter fra Y-kromosomspesifikke produkter, avslørte tilstedeværelsen av Y-kromosomer i denne cellelinjen av antatt kvinnelig opprinnelse. De generelle funnene ble bekreftet ved hjelp av QM-farging, C-banding og FISH, med en helkromosom paint-probe til det humane Y-kromosomet.

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HBL-100 (Cytion-katalognummer 300178)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_4362

05Uttrykk og mottakelighet

Antigenuttrykk
HLA A1, A10, A11, B7, B8
Isoenzymer
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 2, ES-D, 1, Me-2, 0, GLO-1, 2, AK-1, 1-2, Fenotypefrekvensprodukt: 0.0008
Virus
Cellene inneholder et tamdemly integrert SV40-genom, og det har blitt rapportert at de kan inneholde et type D-retrovirus som er likt eller identisk med Mason-Pfizer monkey virus (MPMV).
Revers transkriptase
Positiv

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
McCoys 5a, m: 3,0 g/L glukose, m: stabil glutamin, m: 2,0 mM natriumpyruvat, m: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820200a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
1 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining
Etter tining, plasser cellene på 5 x 104 celler/cm2 og la cellene komme seg etter fryseprosessen og feste seg i minst 24 timer.
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
27 år
Etnisitet
Kaukasisk